细胞生物学研究方法.pptVIP

* * * * * * * * * FRET是通过分子间的电偶极相互作用将供体激发态能量转移到受体激发态的过程,它是一种非辐射跃迁[2?]，发生FRET时，分子间距离小于10nm。如果发生FRET，则供体通路信号将淬灭而受体通路信号将激活或增强(Herman,?1998)。FRET显微技术高度依赖如何快速高效地捕获来自标定分子间相互作用的短暂微弱的荧光信号的能力。由于能量传递发生在1-10nm，一个FRET信号代表了一个显微镜图象中的一个特殊位置。这等效于提供了一个额外的放大倍数，使?FRET超越显微镜的分辨率限制而以分子尺度分辨出供体-受体的平均距离，并能显示出受体-供体的相互作用。广泛用于FRET研究的的供体-受体荧光基团来自自发荧光蛋白GFPs.。选择GFPs作为可工作的FRET对，要仔细考虑其光谱特性：对选定的供体受体配对，它们的激发光谱要足够分离，供体发射光谱与受体激发光谱部分重叠(30%)以获得足够的能量传递；供体受体发射光谱的合理分隔，以便独立测量每个荧光基团的荧光。根据生物学应用的不同，有一些FRET对的组合。常用的FRET对荧光基团有：CFP-YFP；CFP-dsRED；BFP-GFP；GFP-dsRED；YFP-dsRED；Cy3-Cy5；Alexa488-Alexa555；Alexa488-Cy3；FITC-?Rhodamine?(TRITC)；YFP-TR