玉米叶片酵母双杂交cDNA文库的构建及评价.pdfVIP

维普资讯 蕃 北 磨 盐 学报 2008，17(5)：162-165 ActaAgriculturaeBoreali-occidentalisSinica 玉米叶片酵母双杂交cDNA文库的构建及评价 张军杰 ，崔红军 ，黄玉碧 (1．四川农业大学理学院，四川雅安 625014；2．NJq农业大学玉米研 究所 ，四川雅安 625014) 摘 要 ：以玉米骨干 自交系 478为试验材料 ，从各生长时期的叶片中提取总 RNA后 ，再利用磁珠法从中分离 纯化出mRNA，然后 以mRNA为模板 ，反转录合成 cDNA第一链 ，再在 DNA聚合酶作用下，通过长距离 PCR，扩增双链 cDNA (dscDNA)。利用 SMART技术 ，通过同源重组的方法 ，在酵母菌株 AH109中构建 了 玉米叶片全长 cDNA文库。经检测，文库的转化率为 1．54×10转化子 ／3 gpGADT7一Rec，文库滴度为 1．03 ×10 pfu／mL，重组率为 95 。 关键词 ：玉米叶片；酵母双杂交文库 ；构建 中圈分类号 ：Q786 文献标识码 ：A 文章编号：1004—1389(2008)05—0162—04 ConstructionandAppreciationofYeastTwoHybrid cDNA LibraryofM aizeLeaf ZHANGJun—jie，CUIHong—jun。andHUANGYu-bi (1_CollegeofLifeScience，SichuanAgriculturalUniversity，YaanSichuan，625014，China； 2．MaizeResearchInstitute，SichuanAgriculturalUniversity，YaanSichuan 625014，China) Abstract：Themaizeinbred line478wasused experimentmateria1，and thetotalRNA wasisolated from eachperiodsofgrowthmaizeleafandmRNA wasseparatedandpurifiedusingtheSA—PMPs method．Afterwords，mRNA wasusedascyclostyleandsynthesizedtheprimacyeDNA．UnderDNA polymerasefunction，DNA wasexpand doublestrand DNA by using LD-PCR approach．Using SMART techniqueandhomologousreorganizationmethod，theyeasttWO hybrid cDNA librarywas constructedin yeastAH109，Afterexamination。the1ibrary conversion ratewas1．54×10 transfers beggar／3 gpGADT7一Rec，thecapacityofthelibrarywas1．03×10。pfu／mL，andthereorganization ratewas95 ． Keywords：Maize1eaf；YeasttWO hybridcDNA library；Construction 玉米是主要的粮食、饲料作物和工业原料 ，利 产量及改善品质提供理论依据[2]。但 目前关于玉 用酵母双杂交技术建立玉米 叶片 的全长 cDNA 米叶片酵母双杂交全长 cDNA 文库 的构建还 未 文库对于研究玉米叶片蛋 白质与蛋 白质、蛋 白质 见报道 ，因此本试验通过利用 SMART技术和同 与RNA、蛋白质与小分子等的相互作用有着重要 源重组的方法 ，在酵母菌株 AH109中构建了玉 的意义口]。同时，玉米叶片酵母双杂交 cDNA文 米叶片全长 cDNA文库 ，以叶片 mRNA为模板 ，