【优秀精品】毕业设计 毕业论文 蛋白质组学研究技术及其进展.docVIP

蛋白质组学研究技术及其进展 摘要：蛋白质组学是以生物体系整体蛋白质为研究对象的新的研究领域。近年来，蛋白质组学研究取得了令人鼓舞的进展，一些新技术也得到迅猛的发展和改进，蛋白质组学研究主要依赖4大技术：蛋白质分离技术、蛋白质鉴定技术、蛋白质相互作用分析及生物信息学。现就蛋白质组学相关技术的研究进展作一综述，最后重点介绍了生物信息学在蛋白质组学中的应用。 关键词：蛋白质组学 研究技术 生物信息学 蛋白质组学研究的首要任务是建立获取和分析蛋白质的常规、可靠、有效的技术。为达到这一要求，就需要样品准备、数据获取标准化及自动化，也就是要有可重复的高通量的技术。蛋白质组研究的技术手段在不断完善，其工作流程是多步骤进行，包括蛋白质样本的制备、分离、定量及鉴定。由双向凝胶电泳、质谱技术、酵母双杂交系统、蛋白质微阵列技术、能进行大规模数据处理的计算机系统和软件、软电离技术及生物信息学技术构成了蛋白质组学研究的主要技术体系。 1 蛋白质分离技术 1.1 双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis，2-DE) 双向凝胶电泳是由SMITHIEA和POULIK在1956年发明的，并于1975年由0’FARRELL做了改进，并建立起了双向凝胶电泳技术体系[1]。2-DE原理是：第一向进行等电聚焦，蛋白质沿pH梯度进行分离，至各自的等电点；再根据分子量的不同，在第一向基础上，通过聚丙烯酰胺垂直的方向电泳进行分离。1982年Bjellqvist等[2]开始采用固相pH梯度胶（immobilized pH gradients，IPG）。与传统两性电解质载体在电流作用下形成pH梯度不同，IPG由丙烯酰胺衍生物与聚丙烯酰胺共价聚合而成固相pH凝胶梯度，消除了传统IEF阴极漂移问题，具有快速、重复性好等优点[3]。 2-DE可使我们较快地获取样本整个蛋白质组大量蛋白质变化、分布的宏观信息，同时也可以借助后续的方法进行微观分析。此外，它还具有高通量的优势。2-DE也有其自身局限性，主要在于（1)在二维凝胶电泳图谱上，并不是每个蛋白点所包含的蛋白量都足以用于鉴定蛋白；(2)存在歧视性问题，如对于低丰度蛋白、疏水性蛋白、极碱性蛋白(pI9)、一些极大蛋白(相对分子质量200，000)和极小蛋白(相对分子质量8，000)，二维凝胶电泳还不能够将其很好地显示出来，仅仅只有一些可溶的蛋白能被分析；(3)费时、费力，难以实现与质谱(Ms)的直接联用等，蛋白组学研究在一些方面受到了限制[4]。 近年来又发展了荧光差异双向凝胶电泳(two dimensional luorescence difference in gel electrophoresis，2D—DIGE)，采用不同的荧光染色，分别对两个样本蛋白质进行标记，将标记的样本混合后进行2-DE，由于2种荧光染料的发光波长不同，从而在同一块胶上的2个样品的蛋白质进行分离，并能准确测出含量差异。与利用传统的双向电泳及染色方法进行表达蛋白质组的比较相比，显著地减少了样品和染色时操作的差异，提高了重复性，特别是内标的引入，进一步提高了这一技术的定量的准确性和统计的可靠性[5]。2D-DIGE结合质谱分析是发现肿瘤细胞特异性分子和鉴别肿瘤标记物的重要工具[6]。 1.2 色谱技术 近年来，色谱技术的发展为蛋白质和多肽或亚基的分离分析提供了新的手段。色谱技术是利用各种物质在固定相和流动相之间不同的分配系数，使其在相对运动着的两相间经反复多次分配，以不同速度移动，从而获得分离的方法。按两相状态来分类，有气相色谱法（gas chromatography，GC）和液相色谱法（liquid chromatography，LC）两种，而其中的LC是蛋白质组学非凝胶蛋白分离技术中最常用的方法。单一的液相分离技术常不能满足复杂蛋白质复合物分离的需要，多维液相分离系统则在技术上弥补了单一的液相分离技术的不足。多维液相分离系统是两种或两种以上具有不同分离原理特性的液相分离方法的优化和组合，它有效地提高了系统对样本的分辨率和峰容量。此外，多维液相分离系统还具有快速、高通量、自动化、重复性好等优点[7]。常见的多维液相分离系统有二维液相色谱、二维毛细管电泳、液相色谱-毛细管电泳等。色谱技术除了直接对蛋白分离分析外，常与质谱技术联用。它与质谱结合，并与电离喷雾质谱或电离喷雾串联质谱联用，借助计算机的联机检索，实现了高通量筛选和鉴定蛋白质混合体系的要求。色谱分析法与2-DE比较具有操作过程简单、分析速度快、分离效能好和灵敏度高等优点，尤其将分离物直接与质谱连接，实现了分离和鉴定一次完成。目前，蛋白质组研究中高效液相色谱与质谱联用的方式有一维色谱-质谱联用技术、多维色谱-质谱联用技术以及亲和色谱-质谱联用技术等。