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②使用方法:如下图所示,第一步,计数时先将盖玻片放在计数室上,将试管轻轻振荡几次,用吸管吸取培养液,滴于盖玻片边缘,让培养液自行渗入到计数板上方格内;第二步,用适宜浓度的台酚蓝染液或亚甲基蓝溶液染色,染色过程中多余液体用滤纸吸去;第三步,稍等片刻,待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部,将计数板放在载物台的中央,显微镜下五点取样或四点取样抽样计数方格内的菌种数。 用适宜浓度的台酚蓝染液或亚甲基蓝溶液染色的目的是:台酚蓝染液可将死亡的酵母菌染成蓝色,而活的酵母菌不着色;亚甲基蓝溶液可将活的酵母菌染成蓝色,而死亡的酵母菌不着色。计数时只计活的酵母菌数量。 若不染色,则不能区分酵母菌的死活,计数的是所有酵母菌的数量,这样就会使测定结果与实际结果比偏高。 ③计数方法:使用血球计数板计数时,先要测定每个小方格中微生物的数量,再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量(1mL=1000mm3)。计算公式如下: 汤麦式(25×16型):1mL酵母菌培养液中的细胞数=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数 (五点取样法) 希利格式(16×25型):1mL酵母菌培养液中的细胞数=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数 (四点取样法) 注意:①显微计数时,对于压在计数方格边线上的酵母菌,应只计固定的相邻两条边及其顶角的酵母菌,每天计数酵母菌数量的时间要固定。 ②本实验是探究培养液中酵母菌种群数量随时间的变化规律,因而需要从原培养液中取菌种,再接种到新培养液中培养,这一过程实际上也是稀释的过程;此外,培养一段时间后,随酵母菌数量的增多,很难在计数室中数清时,溶液需要进行定量稀释。 (2)设计实验 对实验进行设计要依据单一变量原则、对照原则等。本实验是探究培养液中酵母菌种群数量随时间的变化规律,因此自变量是时间(天数),形成前后对照,不必设计对照实验。除含糖的液体培养基(培养液)定量外,其他条件也要控制在适宜条件下。因变量是酵母菌的数量,可通过血球计数板显微计数及计算测定。 凡是涉及到用数据说明实验结果的,为了获取较为准确的数据,减少实验的偶然性和实验误差,需要设置重复实验,所有实验步骤全部重复。结果的记录最好用记录表。培养和记录过程要尊重事实,不能主观臆造,应真实记录。表格如下: 平均 3 2 1 7 6 5 4 3 2 1 时间次数 【典例精析】 【例3】某爱好小组通过用不同浓度的葡萄糖培养液来探究较适宜酵母菌生长的葡萄糖浓度。从开始培养到实验结束,观察酵母菌种群数量在7天内的变化情况。实验材料齐全。 (1)作出假说: 。 (2)每天的相同时刻,对每一组培养液中的酵母菌进行观察计数。列举计数时应该用到的设备至少两种: 。 在不同浓度的葡萄糖溶液中,酵 母菌的生长速度不同 滴管、显微镜、盖玻片、血球计数板 (3)探究实验步骤: ①取试管10支, 。 ②配制不同浓度的葡萄糖溶液: 。配制完 成后, 。 ③在10支试管中 。 ④首先,对每支试管中的酵母菌 数量进行估算。之后连续观察、统计7天,并作记录。 ⑤根据每一组酵母菌 在7天中的变化,可以确定较适宜酵母菌生长的葡萄糖液浓度。 编号 1%、2%、3%、 …、10%的葡萄糖溶液 依次在1、2、3、…、10号试管中都倒入10毫 升葡萄糖溶液 依次倒入1毫升酵母菌培养液 初始 数量 (4)怎样处理实验过程中出现的下列问题? ①假如实验时发现一个小方格内酵母菌数量过多,难以数清时,该如何处理? 答: 。 ②实验中在统计每一小方格中的酵母菌数量时,对于压在小方格界线上的酵母菌应如何计数? 答: 。
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