转马铃薯α-淀粉酶基因工程酵母菌的构建论文完整.doc

PAGE 转马铃薯α-淀粉酶基因工程酵母菌的构建 摘 要 在工业上对α-淀粉酶的研究一直十分重视，特别是在酒精的发酵过程中。酒精发酵能否进行主要依赖于环境介质中的葡萄糖。虽然马铃薯块茎中的淀粉含量高，但是在现行酒精发酵中的糖化效率低而不被认为是良好原料。为了解决这一问题，我们从马铃薯中克隆出编码马铃薯α-淀粉酶基因，经体外构建后导入酵母菌，培育出可有效降解马铃薯块茎淀粉、转基因酵母工程菌，使其能够大量应用于发酵工业中。 关键词： α-淀粉酶; 反转录; 酵母; 构建 Abstract The study on α-amylase is one of the most active fields in industrial fields, especially in the alcohol fermentation process. The availability of alcohol fermentation mainly depends on the glucose medium in the environment. Although the potato tuber content every high starch, in the current alcohol fermentation of inefficient glycosylation is considered a good rather than raw materials. In order to solve this problem, we cloned potato α-amylase gene from potato, the yeast in vitro after the import, produce effective degradation of potato tuber starch, yeast genetically modified to enable it to apply a large number of fermentation industry. Keywords: α-amylase; reverse transcription; yeast; construction 目 录 TOC \o 1-3 \h \z \u HYPERLINK \l _Toc201135206 一.综述 4 HYPERLINK \l _Toc201135207 （一）研究目的及科学意义 4 （二） HYPERLINK \l _Toc201135209 国内外研究现状 4 HYPERLINK \l _Toc201135210 （三）α-淀粉酶简介 4 HYPERLINK \l _Toc201135211 （四）淀粉酶分类 5 HYPERLINK \l _Toc201135212 （五）α-淀粉酶催化机制 5 HYPERLINK \l _Toc201135213 （六）α-淀粉酶的应用 5 HYPERLINK \l _Toc201135214 （七）预期的经济和社会效益 6 HYPERLINK \l _Toc201135215 二.材料与方法 6 HYPERLINK \l _Toc201135216 （一）材料 6 HYPERLINK \l _Toc201135217 1.原料 6 HYPERLINK \l _Toc201135218 2.PCR引物 6 HYPERLINK \l _Toc201135219 3.试验主要设备 7 HYPERLINK \l _Toc201135220 4.试剂 7 HYPERLINK \l _Toc201135221 （二）实验方法 7 HYPERLINK \l _Toc201135222 1.引物设计与合成 7 HYPERLINK \l _Toc201135223 2.引物稀释 8 HYPERLINK \l _Toc201135224 3.提取RNA前的实验准备工作 8 HYPERLINK \l _Toc201135225 4.试剂的配制 9 HYPERLINK \l _Toc201135226 （三）Trizol法提取总RNA 9 HYPERLINK \l _Toc201135227 1.原理 9 HYPERLINK \l _Toc201135228 2.操作步骤 10 （四）马铃薯α-淀粉酶基因的克隆 HYPERLINK \l _Toc201135229 10 HYPERLINK \l _Toc201135230 1.RT-PCR反应 10 HYPERLINK \l _Toc201135231 2.PCR反应 PAGEREF _Toc201