高效液相色谱法测定血管紧张素转换酶抑制剂活性的方法学及其应用研究.pdfVIP

１ 【实验研究】 高效液相色谱法测定血管紧张素转换酶抑制剂活性的方法学及其应用研究 １ １ １ ２ １ 鲁健章 ，周彦钢 ，贾建萍 ，张舟艺 ，孙丽华 （１．浙江省医学科学院，杭州　３１００１３；２．浙江中医药大学，杭州　３１００５３） ［摘要］　目的：建立高效液相色谱快速测定血管紧张素转换酶抑制剂活性的方法。方法：以马尿酰－组胺酰－亮氨酸为 底物，血管紧张素转换酶为催化剂，血管紧张素转换酶酶促反应产物马尿酸为检测指标，卡托普利为抑制剂的代表进行 方法学研究。采用ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａＣ色谱柱，流动相为甲醇和乙酸溶液，等度洗脱，检测波长为２２８ｎｍ。根据保留时 １８ 间定性，外标峰面积法定量。结果：马尿酸最低检测限为０．０１ ｍｏｌ／Ｌ，加标回收率为９３．８％～１０３％。应用该方法测得 μ 实验室制备的鳕鱼寡肽浓度与其ＡＣＥ抑制率呈自然对数关系，计算得ＩＣ为４．５６ｍｇ／ｍｌ。结论：该方法可作为体外测定 ５０ 血管紧张素转换酶抑制剂活性的方法，具有操作简便快捷、精密度和准确性高的特点。 ［关键词］　高效液相色谱法；血管紧张素转换酶抑制剂；鳕鱼寡肽；马尿酸 ［中图分类号］　　　　　［文献标识码］　Ａ　　　　［文章编号］　１００４－８６８５（２０１１）０７－－０３ Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇｅｎ ｚｙｍｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒｂｙＨＰＬＣ １ １ １ ２ １ ＬＵＪｉａｎ－ｚｈａｎｇ，ＺＨＯＵＹａｎｇ－ａｎｇ，ＪＩＡＪｉａｎ－ｐｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＺｈｏｕ－ｙｉ，ＳＵＮＬｉ－ｈｕａ （１．ＺｈｅｊｉａｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００１３，Ｃｈｉｎａ；２．ＺｈｅｊｉａｎｇＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００５３，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　ＴｈｉｓｓｔｕｄｙｓｅｔｕｐａｌａｂｏｒａｔｏｒｙＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＣｏｎｖｅｒｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅｓａｓｓａｙ． Ｈｉｐｐｕｒｉｃａｃｉｄｉｓｔｈｅｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｉｎｄｉｃａｔｏｒ，ｗｈｉｃｈｉｓｔｈｅｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｐｒｏｄｕｃｔｏｆｓｕｂｓｔｒａｔｅＮ－Ｈｉｐｐｕｒｙｌ－Ｈｉｓ－Ｌｅｕｗｉｔｈａｎｇｉｏｔｅｎ ｓｉｎｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅ．Ｔｈｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｌｕｍｎ，ｍｏｂｉｌｅ １８ ｐｈａｓｅｍｅｔｈｙｌｈｙｄｒａｔｅａｎｄＡｃｅｔｉｃＡｃｉｄ，ｉｓｏｃｒａｔｉｃｅｌｕｔｉｏｎａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｎｇｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ２２８ｎｍ．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｗａｓ ０．０１ ｍｏｌ／Ｌ．Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｏｆｈｉｐｐｕｒｉｃａｃｉｄｗｅｒｅｂｅｔｗｅｅｎ９３．８％ｔｏ１０３％．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｅｒｅａｒｅ