供体特异性体内免疫状态定量检测方法的研究.pdfVIP

·536· ·实验研究· 供体特异性体内免疫状态定量检测方法的 研究 蒋泽生高毅 【摘要】 目的建立具有供体抗原特异性的体内免疫状态定量检测方法，探讨该方法的流式 检测技术参数、荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点。方法取C57及BALB／C小鼠 脾脏制备脾细胞单细胞悬液，分别用不同浓度羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)染色后制备l：1混合细 胞悬液，按混合细胞输注C57．BALB／C小鼠皮肤移植排斥模型，不同时间点(分别为输注后1、2、4、 lO h、l、2、3、6d)，流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化，同时设未移植BALB／C小鼠为 对照组，探索CFSE荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点，按公式计算供体特异性细胞 杀伤率：％specificlysis=1一donoreel]s／recipientceils×100％。结果CFSE染色时需要较大浓度 差才能完全把两群脾细胞完全分离开，在浓度相差20倍时流式直方图才显示为两个完全独立的 峰；即CFSE低浓度用0．3 pxnol／L，高浓度用6ttmol／L。C57．BALB／C皮肤移植排斥模型在皮肤移植 h、l、2d特异性 后两周即可建立，混合细胞悬液输注后，模型组与对照组输注混合细胞后l、2、4、10 杀伤率差异有统计学意义(t=39．5、41．1、26．2、27．4、15．8、5．5，P均0．01)。模型组输注后lh和 2h杀伤率分别高达(87．4±4．5)％、(92．2±3．9)％。结论供体特异性体内免疫状态定量检测方 法流式检测设定在淋巴细胞门，两种细胞CFSE的染色浓度差控制在20倍左右，输注细胞总数在一 定范围内对结果没有影响，输注细胞后2—4h为最佳检测时间点，体内细胞毒性实验是一种简单、 准确、稳定的免疫状态体内定量监测方法。 【关键词】脾细胞；免疫状态；荧光流式技术 Research ofdonorspecific to啪nitortheimmunestatus加vivo quantitativeImmunolo蒯assay 珏蛾G Yi．dond Medi- Ze—sheng．GAO DepartmentofHepatobiliarySurgery，ZhujiangHospital．Southern 碰University。Guangzhou510282．China author：6，AD Corresponding Yi．Email：zsjiang@hotmail．COrn Toestablish of vivo amethoddonor in for 【Abstract】Objective specificcytotoxicityassay quanti- theimmunestatusofthe flow C57BL／6j(H-2b) tativelydetecting recipientusing cytometry．Methods and were with diaeetatesuccinimi． BALB／C(H-2d)splenocytesharvested，labelled5，6-earboxyfluorescein afinalconcentrationof0．3and6 skin model dylester(CFsE)at i^mol／L．respectively．Atransplantation Wasestablishedwiththe BALB／Cmiceandth