菌寄生真菌黄蓝状菌(Talaromyces flavus) 几丁质酶基因的克隆与生物信息学分析.pdfVIP

农业生物技术学报，  年， 第  卷， 第  期， 第  页  2011 19 6 1089~1098 Journal ofAgriculturalBiotechnology,2011,Vol.19,No.6, 1089~1098  研究报告  ALetter  菌寄生真菌黄蓝状菌 Talaromyces fla v us 几丁质酶基因的克隆与生物信 ( ) 息学分析 1,2  2  1  1*  咸洪泉  汤伟  李安娜  李多川  1 271018 2 266109  山东农业大学植物保护学院， 泰安  ； 青岛农业大学生命科学学院， 青岛  * lidc20@  通讯作者，  摘 要 菌寄生真菌的几丁质酶有很强的降解几丁质能力， 在控制植物病害方面起着重要的作用。为克隆 和研究菌寄生真菌黄蓝状菌 Talaromyces fla v us 几丁质酶基因 tfchi1 ， 本研究根据真菌几丁质酶基因的保守 ( ) ( ) 序列设计扩增基因中间片段的简并引物，采用  、  及  的方法获得了该基因的  RT­PCR 3­RACE  5­TAIL  DNA  和  序列 。tfchi1 长为  ， 具有  个 内含子， 长度分别为  、  mRNA  (GenBank: GU361769, GU361770) 2 561bp 6  129 、  、  、  和  ， 包含  的  ， 编码一个由  个氨基酸组成的蛋白。推导的 tfchi1 氨基酸序 78 68 65 53  59bp 1194bp  ORF 397  列 以及蛋 白质结构生物信息学分析表 明，该蛋 白具有典型 的几丁质酶催化 区保守序列 SXGGW 和  ， 属于糖苷水解酶  家族几丁质酶， 与柄篮状菌 Talaromyces stipitatus  几丁质酶  DGXDXDWE 18  ( ATCC 10500) (XP_002480365)氨基酸序列同源性为 96%， 分子量为 43.47kD， 等电点为 4.97。该蛋白无信号肽序列， 有 15  个潜在的  糖基化位点，  的二级结构以无规卷 曲和 琢  螺旋为蛋白的主要结构元件，三级结构中有  N­  Tfchi1  ­  琢 茁    的圆桶形结构。tfchi1 转化毕赤酵母 Pichia p as toris ， 酵母工程菌可分泌具几丁质酶活性的表达 ( / )8  ( )GS115 产物， 重组蛋白的分子量与理论值相符。结果说明，