构建羰基还原酶基因工程菌生物转化产l-麻黄碱.docVIP

第 ７卷第 １期 ２００９年 １月  生　物　加　工　过　程 Ｃｈｉｅｓ ＪｕｒａｌｏｆＢｉｐｒｃｅｓ Ｅｎｇｉｅｅｒｎｇ  Ｖｏｌ７Ｎｏ．１ Ｊｎ．２００９  构建羰基还原酶基因工程菌 生物转化产 ｌ－麻黄碱 孟晨璐，张　梁，丁重阳，王正祥，石贵阳 （江南大学 生物工程学院，无锡 ２１４１２２） 摘　要：以筛选得到的 Ｍｏｒａｎｅｌ ｍｏｒａｎｉＪ 细菌的基因组为模板，通过 ＰＣＲ扩增得到目的基因 ｍｄｌ２。核苷酸 序列测 定 结 果 表 明，基 因 全 长１０４６ｂｐ。以 ｐＥＴ２８ａ（＋ 为 表 达 载 体，构 建 重 组 质 粒 ｐＥＴ２８ａ（＋ｌｈ，并 在 Ｅ．ｃｌ ＢＬ２１（ＤＥ３）中表达。利用表达产物进行生物转化，发现其具有催化底物 １－苯基 －２－甲氨基丙酮（简称 ＭＡＫ）产 ｌ－麻黄碱的活力。进一步考察了诱导时间和 ＩＴＧ浓度对重组菌表达的羰基还原酶的影响 ３７下用 ０５ｍｍｏｌ／ 的 ＩＴＧ诱导 ４ｈ，重组羰基还原酶的酶活达到 ０２Ｕ／ ｇ蛋白，转化液中 ｌ－麻黄碱质量浓度达到 ４５ｍｇ／。 关键词：不对称还原；羰基还原酶；麻黄碱 中图分类号：Ｑ７８９；ＴＱ９２０．６　　　　文献标志码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－３６７８（２００９）０１－００２９－０５ Ｃｏｎｓｒｕｃｔｏｎａｎｄａｐｐｌｃａｔｏｎｏｆｃａｒｂｏｎｙｌｒｅｄｕｃｔｓ ｇｅｎｅｅｎｇｉｅ