鞘氨醇-1-磷酸受体-1结合肽的筛选及功能验证.pdfVIP

医学研究生学报 2013年7月第26卷 第 7期 JMedPostgra，Vo1．26，No．7，July，至 · 685 · 论 著 (基础研究) 鞘氨醇一1一磷酸受体一1结合肽的筛选及功能验证 张 华 ，樊 霞，陈旭义，杨 波 [摘要】 目的 蛋白鞘氨醇-1一磷酸受体一1(sphingosine—l—phosphatereceptor一1，S1P1)在血管新生中发挥着关键l生作用 ，并在 肿瘤细胞中高表达。研究通过筛选S1P1筛选胞外区结合的功能肽段 ，观察S1P1的抑制对血管内皮细胞及肿瘤细胞增殖的影 响。 方法 在大肠埃希菌BL21(DE3)中融合表达S1P1的胞外区1—46肽段，亲和纯化获得了GST—S1P1 融合蛋白，并以此 目的蛋白为靶标，采用固相包被的方法对噬菌体随机展示 12肽库进行筛选，挑选有高亲和力的噬菌体，经测序得到阳性噬菌体 的小肽序列；随后，将小肽偶连在匙孔蓝蛋白(keyholelimpethemocyanin，KLH)上，并通过Westernblot、细胞免疫荧光、成管实验， 观察偶联肽与人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcell，HUVEC)表达的S1P1结合能力及对HUVEC管形成的影 响，MTF检测偶联肽对肝癌细胞(humanhepatocellularlivercarcinomacellline，HepG2)增殖的影响。 结果 获得了与S1P1有 较高亲和力的2种 12肽。细胞实验证实偶联肽能结合细胞表面的S1P1受体，而且2种偶联肽均能抑制 HepG2的增殖，并抑制 HUVEC细胞的成管行为。 结论 利用噬菌体肽库筛选技术，成功筛选出了具有抑制作用的S1P1结合肽。 [关键词] 鞘氨醇-1．磷酸受体一1；噬菌体展示肽；血管生成；偶联肽 [中图分类号】 R979．5 [文献标志码】 A [文章编号】 1008—8199(2013)07-0685-05 Bio—panningandfunctionalverificationofpeptidesbindingtoS1P1 ZHANG Hua ，FAN Xia ，CHEN Xu—yi，YANG Bo (1．DepartmentofClinicalLaboratory，theAffiliatedHospitaloftheLogistcisUniversityofChinesePeopleSArmedPolice Forces，Tianjin300162，China；2．Department ofClinicalLaboratory，LiaoningProvincialC6 HospitalofChinese PeopleSArmedPoliceForces，Shenyang110034，Liaoning，China；3．NeuroscieneeCenter，4．DepartmentofPharmacy， theAffiliatedHospitaloftheLogisticsUniversityofChinesePeopleSArmedPoliceForces，Tianjin300162，hCina) [Abstract] Objective Sphingosine一1一phosphatereceptor一1playsanimportantroleinangiogenesiswithhighexpressionin tumorcells．TheaimofthisstudyistoscreenthefunctionpeptidesthatcanbindtoextracellulraregionofS1P1(sphingosine·1一phos- phatereceptor． Methods ThefusionproteinGST—S1P1146wereinducedtoexpressinE．coliBI21(DE3)，thenisolatedandpuri— fledbyGSTexchangeresin．Thepurifiedproteinscoatedonpolystyr