本科毕业论文-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法的改进.docVIP

编号： 　　　 本科毕业论文（设计） SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法的改进 学 院 生 命 科 学 学 院 专 业 生 物 科 学 学 号 200740810235 姓　名 孙 静 芳 指导教师 姬 云 涛 职称 教授 完成日期 2011 年 5 月 摘 要 1 关键词 1 Abstract 1 Keywords 1 引言 1 1. 材料与方法 2 1.1 实验材料 2 1.1.1 试剂 2 1.1.2 主要仪器、设备 2 1.2 实验方法 2 1.2.1 溶液的配制 2 1.2.2 制胶 3 1.2.3 电泳 4 1.2.4 染色 5 1.2.4.1 传统考马斯亮蓝染色法 5 1.2.4.2 水浴加热法 5 1.2.4.3 微波炉加热法 5 1.2.5 染色结果观察 6 2. 结果与分析 6 2.1 染色效果与操作的简便性 6 2.2 不同染色方法凝胶成像结果 7 2.3 染色时间 7 3．结论与讨论 8 参考文献 8 致 谢 10 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法的改进 姓名：孙静芳 学号：200740810235 指导教师：姬云涛摘 要：传统SDS- PAGE染色法耗时长，水浴或微波，关键词：SDS- PAGE考马斯亮蓝水浴法染色脱色 A Modified Method for SDSPAGE Staining Name： Sun Jingfang Student Number ：200740810235 Dvisor：Ji Yuntao Abstract: For the traditional SDStime-consuming staining, Coomassie brilliant blue color can be taken off by the ethanol used for bleaching, methanol is toxic,the protein bands is not clear, and other issues,an improved method for the common dyeing is coming.By using a water bath or microwave heat treatment, at the same time changing the composition of dyeing and bleaching liquid,ethanol,distilled water instead of methanol,reducing the time of dyeing off greatly.By comparision,that the bathing method improved reduces the time significantly, dyeing better. Keywords：SDS- PAGEcoomassie brilliant blue；water bathing ；staining； decolorization 引 言 继人类基因组计划之后，蛋白质组学已经成为世纪研究的热点对高分辨率的分离和准确鉴定变得至关重要。目前分离蛋白质主要采用十二烷基酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS- Polyacrylamide Gel Electrophoresis, SDS- PAGE）它的支持介质是三维网状的聚丙烯酰胺凝胶。在催化剂的作用下，单体丙烯酰胺（acrylamide，Acr）与N，N-甲叉双丙烯酰胺（N,N-methylene bisacrylsmide，交联剂 ，Bis）发生聚合反应，生成凝胶介质。由于不同蛋白质分子大小和所带电荷的不同，从而对蛋白质进行分离特异性、较少的干扰因素、操作简便等优点，成为蛋白质电泳检测和定量分析的一种常用方R–350，和R-250三种，在游离状态下，考马斯亮蓝G-250为红色，其最大吸收值为488 nm；而它与蛋白质结合后颜色由红色变为青色，在595 nm 波长下二者的结合物光吸收最大，光吸收值和蛋白质的含量成正比关系，所以可用于蛋白质的定量测定[]。考马斯亮蓝G-250蛋白质迅速进行结合反应，约2 min 即可达到平衡；它们的结合物在室温下1 h 内保持稳定。一般情况下传统考马斯亮蓝染色法染脱时间较长，约 ～h[2 ]，同时在多次漂洗换液的过程中，凝胶表面容易被污染[]，而且凝胶中的SDS会干扰考马斯亮蓝和蛋白质的结合，染色效果。 本文1. 材料与方法 试剂 浓硫酸，甘油，巯基乙醇，－四甲基乙二胺（），浓缩