分子振动光谱在蛋白质构象分析中的应用.pdfVIP

维普资讯 第3卷第4期 生 科II值^ 分子振动光谱在蛋白质构象分析中的应用 林应章 周筠梅 (中国科学院生物物理研究所 ) 从50年代初期开始，人们就尝试应用分子振动光谱分析蛋白质二级结构，先后经 历了定 性阶段和半定量阶段。近五年来 ，去卷积 (Deconvolutlon)和二阶导数(SecondderivaLive) 等提高分辨率方法以及曲线拟合技术的应用，使得振动光谱在定量计算蛋白质二级结构和监 测蛋 白质构象变化等方面取得突破性进展．进入了定量化阶段。已逐渐成为蛋 白质构象研究 的有效方法之一，引起国内外学术界的重视。 蛋 白质的结构，功能和作用机理的研究是分子生物学研究的主要课题。随着生命科学的 发展，人们迫切需要了解蛋 白质在不同环境(例如t水，膜，胶团和有机相)以及生理、非生 理条件下的构象性质。 迄今，人们对蛋白质结构的完整认识，主要来源于对蛋白质晶体的x射线衍射分析，毫 无疑 问，x射线衍射法是测定蛋 白质三维结构的最好方法。然而，它的测定工作需要高质量 的晶体，所得晶体状态 的结构信息有时不能满意地解释溶液状态下蛋 白质的动态性质。二维 棱磁共振技术能够测定较小蛋白质在溶液中的三维构象，可与x射线衍射法相比美，但所需 研究时间较长。荧光光谱、圆二色性以及振动光谱能够在接近蛋白质的天然状态下，快速研 究溶液构象，遗憾的是，这些方法一直不能令人满意地准确定量 。最近报道的振动圆二色性 和富氏变换拉曼光谱技术以及提高分辨率振动光谱法是准确、快速研究蛋 白质溶液构象的最 新进展。简要介绍分子振动光谱法在蛋 白质构象分析中的应用及发展状况。 (--)历史回属 分子撤动光谱(包括红外光谱和拉曼光谱)是人们最早用于蛋白质构象研究的工具之一， 与其他光谱学方法相比，有其独特和潜在的优势t④直接用于分析分子结构，了解基团间的 相互作用，成键形式，构象变化及其环境因素。②可研究任何状态的样品，为研究溶液状态 和固体状态的蛋白质结构架起了桥梁。⑨使用样品量少 (mg或 g)，测定过程不破坏样品。30 余年来，人们为生物分子振动光谱学的发展进行着不懈的努力。大致经历了三个发展阶段。 定性阶段(五、六十年代)、半定量阶段 (70年代)和定量阶段 (8o年代)。 1950年，EllioLL研究了若干多肽分子的红外光谱J1958年，Garfinkol等用汞弧光源和 照相干板首次摄得溶稿酶的拉曼光谱，这些工作揭开了生物分子振动光谱学的序幕。初始阶 段 的研究特点是定性估计蛋白质二级结构的主要成份。 7o年代中期，发展了若干半定量计算蛋白质构象的方法。其中包括； Pezole[方 法、 LipperL方法、EckerL方法和Williams方法等。这些半定量方法的局限性在于它要 求 许多 参数，而实际工作的困难恰恰在于确定这些参数。 近五年来，许多提高分辨率技术的开发和应用，例如t二阶导数谱、去卷积和曲线粗合 ， 使得定量分析蛋 白质二级结构成为可锚o (=)叠白质二圾培辑分析酌定量佬 维普资讯 生 单-息 i09i 多肽和蛋 白质的酰胺基团具有九个特征振动模式或基团频率。其中最常用于二级结构分 析的是酰胺 I带，位于1600—1700cm 范围。酰胺 I带的振动 吸收频率取决于C=0和 N—H 之间的氧键性质，换句话说，特征振动频率反映了多肤和蛋白质的特定二级结构 ( 摄旋、 B折叠、回转结构和无规卷曲)。任一蛋白魔分子，同时都古有多种不同的二级结构，这些构 象所对应的振动吸收峰重叠在一起，形成宽峰。由于各子峰固有的宽度大于仪器分辩率，利 用普通光谱学技术难以将各子峰分开。 从实验得到的蛋白质酰胺 I带的吸收光谱去分析该蛋白质的二级结构含量，大致经过三 个步骤t①识别蛋 白质酰胺 I啼 中各子峰的数 目和峰位值。②确定各子峰的峰值与二级结构 韵对应关系。③利用分峰技术，求出各子峰的峰面积，确定二级结构含量。 1981年，Kauppinent等先后提出红外光谱二阶导