串联双病原物诱导启动子驱动基因表达的特性.pdfVIP

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 43(4)：376-382(2013) 串联双病原物诱导启动子驱动基因表达的特性 孔维文 ，王丹丹。，刘爱新。 (扬州大学园艺与植物保护学院，扬州 225009；。山东农业大学植物保护学院，泰安 271018) 摘要 ：在植物抗病基因工程中，目标基因可控的高效表达是一重要 目标。在前期的研究中，我们将串联的病原物高度特异 性诱导启动子EAS4(EP)和hsr203J(HP)转人烟草，uidA基因在相应病原物或激发子诱导后可被驱动表达。为进一步研究 此串联双启动子驱动的基因表达特性，采用荧光法对GUS诱导表达活性进行了定量检测。结果发现，双启动子表现较高 的诱导表达活性 ，双启动子与单启动子的活性差异均达极显著水平。研究还发现，两个启动子串联的顺序对其活性强度和 时间动态有影响，双启动子HP+EP的诱导表达高峰出现在诱导后6—10h，而EP+HP的活性高峰出现在诱导后8～14h。 同时，初步分析了串联的EP和HP协同促进基因高水平表达的原因。串联的双病原物特异性诱导启动子不但可响应较广 谱的病原物的诱导表达 ，而且可协同促进基因的高效表达，因而在植物抗病基因工程中具有广阔的应用前景。 关键词：植物抗病基因工程；人工启动子；病原物诱导启动子；基因表达调控 Characteristics0fgeneexpression driven by twotandem pathogen—induciblepro— m oters KONGWei．wen ，WANGDan．dan ，LIU Ai—xin (SchoolofHorticultureandPlnatPro~cfion，Yang— zhouUniversity，Yangzhou225009，China； DepartmentofPlantProtection，ShandongAgriculturalUniversity，TalOn271018， China) Abstract：High-levelexpressionofexogenousgenesundercontrolledconditionsisanimportanttargetofge— neticengineeringforplantdiseaseresistance．From ourpreviousreserachitwasshowedthatinresponsetoin— ductionofcertainpathogensorelicitor，uidA intransgenictobaccoplantscouldbedriventoexpressunderhte controloftwohighlypahtogen-induciblepromoters，conca~natedbyEAS4nadhsr203Jpromoter．Inorderto furtherexplorehtecharacteristicsofgeneexpression underhteconrtolofhtetandem promoters，theinduced GUSactivitywasquantitativelyassayedbyhtefluorometricreactionmethodofJefferson．Itwasfoundhtatthe tandem promotershadhigherinducedactivity，andtheactivityoftna dem promotersisverydifferentfrom htat ofsinglepromoter．Furthermore，thetandem orderofthetwopromotershadalso aneffectonintensityand timecourseofinducedGUSactivity．DynamicassayofinducedGUSactivityshowedhtathtetandem HP+EP promotersreachedhtehighestvaluein expression activityafter6—10hourofinduction，while thehighest valueoccurredinhtetandem EP+HP promotersafter8—14 hours．Intheend，thecausesraediscussedofr cooperativelyelevatingtheexpression