一种改进的同步辐射X射线荧光原位分析人肝细胞胞质溶胶内金属蛋白.pdfVIP

( ) 第 31 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究报告 第 4 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2003 年 4 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 395～398 一种改进的同步辐射 X 射线荧光原位分析 人肝细胞胞质溶胶内金属蛋白分布的方法 1 1 1 1 1 2 2 高愈希 　陈春英 　赵九江 　章佩群 　柴之芳 　何　伟 　黄宇营 ( 1 2 ) 中国科学院高能物理研究所核分析技术重点实验室 , 同步辐射国家实验室 ,北京 100039 ( ) 摘 　要 　对同步辐射 X 射线荧光分析技术 SRXRF 原位测定蛋白质经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( ) SDSPAGE 分离后条带中微量元素的方法做了重要改进。通过增加一个干胶步骤 ,使得本底材料对光源的 康普顿散射明显减弱 ,本底信号降低到约为湿胶的 10 % ,从而可以用来测定蛋白条带内比锌轻的微量元素的 相对含量。所提出的方法有望成为一种具有广泛应用前景的生物样品中微量元素的种态分析方法。对人肝 细胞胞质溶胶内金属蛋白分布的研究结果表明 :在 15～95 kDa 的范围内有 6 个含锌蛋白 ,相对分子量分别为 17. 5 、20. 5 、27 、35 、55 及 63 kDa ,其中 63 kDa 蛋白为主要的含锌蛋白 ;此外至少还有 4 种分子量分别为 20 、23 、43 和 83. 5 kDa 的含铁蛋白分布于这个分子量范围内。 关键词 　同步辐射 ,X荧光分析 ,金属蛋白 , 电泳 1 　引　　言 金属蛋白或酶的广泛存在以及金属离子作为蛋白质活性中心和结构中心的重要性已为人们熟知 。 研究组织中金属蛋白的分布对于认识微量元素的生物学意义是很有帮助的。生物样品中金属蛋白分布 的研究方法一般是将样品中的蛋白质分离以后测定其中的金属含量。因为生物样品的组成复杂 ,一个 金属蛋白或亚基往往只含有一个或几个金属离子 ,所以生物样品内金属蛋白分布研究要求有高效、高分 辨的蛋白质分离方法和高灵敏度的微量元素分析方法。 SDSPAGE 是一种灵敏、高分辨的蛋白质分离分析方法。SzkefalviNagy 等1 ,2 用电泳分离铁硫蛋白 ( ) HiPiP 及含 Fe 、Ni 的氢化酶后 ,用质子激发 X 荧光法直接测定了蛋白条带中的 Fe 、Ni 含量。这些样品 ( ) 为已纯化的、金属含量较高的标准蛋白 ,对天然生物样品尚未做过研究。同步辐射 SR 光具有强度高、 ( μ ) ( 准直性好等特点。以其作为激发光源的 X 荧光分析空间分辨率好 ～10 m ,灵敏度高 绝对检出限 10- 12 ～10- 15 g ,相对检出限可达 10 ngg3 ) ,样品只需几微克 ,特别适合于电泳后蛋白条带内微量元素的 测定。本研究组首次将 SDSPAGE 与 SRXRF 分析法相结合