以三维荧光反卷积显微技术研究活体细胞中分泌囊泡的空间分.pdfVIP

生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报 ( ) ISSN ACTA BIOCHIMICA et BIOPHYSICA SINICA 2003 , 35 7 : 671 - 676 CN 311300Q 研究简报 以三维荧光反卷积显微技术研究活体 细胞中分泌囊泡的空间分布 李栋栋 　郭学彬 　瞿安连 　徐 　涛 ( 华中科技大学生命科学与技术学院生物物理与生物化学研究所 , 武汉 430074 ) 摘要 　　获得活体细胞三维图像以观察细胞内分泌囊泡的空间分布有助于细胞分泌机制的研究。三维荧光反卷积 显微技术可以为活体细胞观察提供低荧光漂白 , 低毒副作用的快速三维成像。研究了显微成像系统实验测定和理 论计算点扩展函数之间的关系 , 并且实验验证了NA 1. 65 物镜条件下 , 理论计算点扩展函数可以较好地反映显微 成像系统的特性。然后使用已知物理结构的三维样本对反卷积算法的有效性进行了研究。进而对使用吖啶橙 ( ) β acridine orange 标记的大鼠胰腺 细胞分泌囊泡进行观察。结果显示 , 反卷积算法可以有效地去除原始图像中因 为焦外光影响产生的模糊 , 处理后图像清晰地显示了细胞内分泌囊泡的空间分布。 关键词 　　分泌囊泡 ; 三维荧光反卷积显微技术 ; 点扩展函数 　　内分泌细胞和神经元通过分泌囊泡的胞吐释放 分别测定了NA 1. 35 物镜和 NA 1. 65 物镜条件下成 激素和神经递质。使用生物化学和电生理方法对分 像系统的 PSF , 同时研究了 PSF 的数学模型 , 证实 泌过程的研究已取得显著进展[13 ] , 但是对于分泌囊 在本文成像条件下理论计算 PSF 的正确性。使用已 泡胞吐前阶段的研究只能通过动力学模型推测。对 知物理构造的三维样本讨论了一种反卷积算法的有 活体细胞分泌囊泡进行直观观察将有助于深入了解 效性。对大鼠胰腺β细胞内分泌囊泡的观察结果显 分泌囊泡在细胞内的整个动态过程。利用全内反射 示反卷积处理后的细胞三维图像清楚地展现了分泌 显微技术对细胞膜附近分泌囊泡动态过程的定量研 β 囊泡在 细胞内的分布情况。 究已经发现了很多有价值的信息[46 ] , 然而这种技术 无法观察发生在细胞内部较深处的分泌囊泡运动过 ( ) 1 　材料和方法 Materials and Methods 程。共聚焦显微技术可以获得细胞的三维图像 , 但 1. 1 　数据采集系统 其高强度激发光使荧光染料被快速漂白并对细胞造 ( ) 宽场荧光显微镜 IX70 ; Olympus , 日本 , 物镜 成毒副作用。共聚焦系统的逐点扫描成像方式可能 (APO 100 ×1. 65 NA Oil HR ; UPIanApo 100 ×1. 35 导致图像不能正确反映在扫描时间内发生在细胞内 NA Oil Iris ; Olympus ) , 单