乙型肝炎病毒大表面蛋白的豆蔻酰化为其体外感染所必需.docVIP

原 文：Myristylation of the Large Surface Protein Is Required for Hepatitis B Virus in Vitro Infectivitys 作 者：VOLKER BRUSS, JENS HAGELSTEIN,?ELLEN GERHARDT and PETER R. GALLE 作者单位： 1 Department of Medical Microbiology, University of Gottingen, D-37075 Gottingen, Germany; 2 Gastroenterology Unit,Department of Internal Medicine IV, University of Heidelberg, Heidelberg, Germany 发表刊物：VIROLOGY 218, 396–399 (1996) ARTICLE NO. 0209 以下为中文翻译稿： 乙型肝炎病毒大表面蛋白的豆蔻酰化为其体外感染所必需 摘要：乙型肝炎病毒大表面蛋白在第二位甘氨酸上发生豆蔻酰化。为调查该脂肪酸部分是否为乙型肝炎病毒所必需，我们将豆蔻酰化受体氨基酸突变成无功能的丙氨酸。突变体病毒和野生型对照均在人肝细胞系中进行表达。经免疫沉淀病毒粒子的内源聚合酶活性检测得知，两者分泌形成相近数量的病毒粒子，粒子表面L蛋白N端抗原决定簇的分布也没有受到任何影响。为测试这些突变病毒株的感染力，将人原代肝细胞与转染细胞的培养液一起孵育。感染后所产生的乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA与孵育病毒粒子的开放环状DNA可通过一种敏感的PCR依赖的技术区分开来。实验显示，野生型病毒粒子具感染性而不能豆蔻酰化的突变体则不具感染性。这与同源鸭HBV突变体的表现型一致，尽管两者L蛋白N端不具任何序列同源性。 病毒如何选定并进入其宿主细胞是乙型肝炎病毒学上尚未解决的一个主要问题。我们在该领域的无知在某种程度上是由于乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）狭窄的宿主域和众所周知的组织向性：它仅感染人和高级灵长目动物以致缺乏合适的动物系统；它仅能在肝细胞中复制（1）。来自人肝细胞的永久细胞系，如HepG2和HuH7，已经丧失病毒感染的敏感性，尽管通过转染基因组仍能产生具感染力的病毒（2）。只有人原代肝细胞在移植后的数小时内可被感染，且他们也只产生非常少的子代病毒（3-5）。因此，关于感染的大多数工作都是在同属嗜肝病毒科（hepadnaviridae）的鸭乙型肝炎病毒（duck hepatitis B virus，DHBV）系统内进行。但尽管鸭肝细胞原代培养已经可行，DHBV进入宿主细胞的机制仍然还没有得到阐明。 HBV的感染单位是直径42nm的有包膜的具二十面体核衣壳的病毒粒子。感染细胞还分泌直径22nm的球形或丝状亚病毒颗粒，这些粒子由脂质和HBV表面蛋白组成，但因这些蛋白不具衣壳结构而不具感染性。决定宿主细胞的选择和早期进入步骤的病毒表面由三个相关联的蛋白构成（6）：大表面蛋白L含400个氨基酸（ad亚型病毒），由病毒env基因编码；中表面蛋白M与L蛋白C端281个氨基酸相当，由env同框的内部起始密码子起始表达，小表面蛋白S与M和L蛋白C端226个氨基酸相同，因为它起始于env同框的另一个更远的内部起始密码子。M和S蛋白的起始位点将L蛋白序列分成N端preS1，中间preS2和C端S三个部分。 病毒和亚病毒颗粒表面，可能作为病毒受体的配体的表面蛋白的结构域通过多种途径进行了确定，如单克隆抗体抗原决定簇谱(ER)膜上的跨膜拓扑学结构分析（8-12）。这些研究显示：构成亚病毒颗粒主要抗原决定簇的S结构域的中间部分、M的preS2结构域以及L的preS1和preS2结构域均暴露在病毒粒子表面，而S结构域的N端和C端则隐藏在内部。这些实验还证实，L蛋白通过其S区域内的II型信号锚定在内质网上，而其preS结构域则暴露在内质网的胞质一侧从而位于病毒包膜的内侧(8, 11, 12)。只有在翻译后，约占L链一半长的preS 结构域(8)经由一种尚不知道的机制,转移跨过脂质双分子层暴露在外面。 HBV L蛋白，与DHBV L蛋白相似(13)，在翻译过程中被修饰——豆蔻酸残基与第2位甘氨酸共价连接(14)。阻断脂肪酸连接的点突变对于HBV（15）或DHBV（13）病毒粒子的形态发生没有任何影响，但能阻断DHBV的体内感染（13）。因此，我们利用人原代肝细胞的体外感染系统来调查HBV感染对豆蔻酰化部分的需求。首先，在HepG2细胞中瞬时表达