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四、基因转移 1.基因转移（gene transfer）概念 将外源基因导入受体细胞并整合至受体细胞的基因组中，使之遗传性状及表型发生一定改变的技术。由此可选择出所需的新型细胞或新的个体。若外源基因不但能在动物体内表达，并且可以遗传，则该动物称为转基因动物（transgenic animal）。 退 出 首 页 Cell Engineering 第十八章 细胞工程 2.转基因技术的步骤 外源目的基因的选择与获取； 将外源目的基因导入受体细胞； 对整合有目的基因的细胞进行筛选、扩增及鉴定； 若受体为卵细胞，则进行体外培育，并植入合适的动物子宫内； 筛选并获得转基因动物。 退 出 首 页 Cell Engineering 第十八章 细胞工程 四、基因转移 2.转基因技术的步骤 退 出 首 页 Cell Engineering 第十八章 细胞工程 四、基因转移 3.转基因的方法 物理法： 电穿孔法、显微注射法、裸DNA直接注射法等。 化学法： 磷酸钙共沉淀法、脂质体包埋法、 DEAE-葡聚糖法等。 生物法： 病毒介导法、体细胞核移植法、精子载体法、胚胎干细胞转染法等。 退 出 首 页 Cell Engineering 第十八章 细胞工程 四、基因转移 3.转基因的方法 ⑴ 磷酸钙介导的DNA转染 原理及基本过程：将氯化钙与外源DNA混合，加入到含磷酸根离子的溶液中，形成钙-磷酸-DNA共沉淀物，该沉淀物被培养的细胞摄取，DNA整合入细胞基因组中最终得到表达。 优点：操作简单，无需昂贵的设备。 退 出 首 页 Cell Engineering 第十八章 细胞工程 四、基因转移 3.转基因的方法 ⑵ 脂质体介导的转染 原理及基本过程：以一种多价阳离子脂质体作为载体，DNA可被脂质体包被形成复合物，该复合物可与培养细胞的细胞膜融合，DNA进入细胞，整合至受体细胞的基因组中并得以表达。 优点：转染成功率高、适应性广，细胞毒性较低。 缺点：比较昂贵，不利于大规模使用。 退 出 首 页 Cell Engineering 第十八章 细胞工程 四、基因转移 3.转基因的方法 ⑶ 电穿孔法 原理及基本过程：高浓度细胞悬液短暂地暴露于高电压时，DNA可通过高电压在细胞膜上所形成的小孔进入细胞，然后整合入细胞的基因组并得到表达。 退 出 首 页 Cell Engineering 第十八章 细胞工程 四、基因转移 3.转基因的方法 ⑶ 电穿孔法 适用范围： 对化学法转移不敏感的细胞； 悬浮细胞更适合。 缺点： 所需细胞及DNA数量多； 不同细胞间的最佳转染参数差异较大，需进行实验条件摸索。 退 出 首 页 Cell Engineering 第十八章 细胞工程 四、基因转移 3.转基因的方法 ⑷ 病毒转染法 原理：通过病毒感染的途径将外源目的基因 导入受体细胞。 退 出 首 页 Cell Engineering 第十八章 细胞工程 四、基因转移 3.转基因的方法 ⑷ 病毒转染法 常用方法： DNA病毒载体：为双链DNA病毒，不整合入人染色体，不会导致肿瘤发生。安全性好，适用的受体细胞广， 外源基因在载体上容易高效表达。 逆转录病毒载体：为单链RNA病毒，进入细胞后反转录为双链DNA，将外源基因整合入受体细胞的基因组 退 出 首 页 Cell Engineering 第十八章 细胞工程 四、基因转移 3.转基因的方法 ⑸ 显微注射法 原理及基本过程：在显微操作仪下，通过玻质注射针将DNA迅速注入受精卵内，通常为注入雄性原核内或者在其附近，然后将受精卵移植至假孕动物的输卵管中，最后产生转基因动物。 退 出 首 页 Cell Engineering 第十八章 细胞工程 四、基因转移 3.转基因的方法 ⑸ 显微注射法 用途：制备转基因动物。 缺点：实验装备显微操作仪较昂贵，操作人员必须经培训。 退 出 首 页 Cell Engineering 第十八章 细胞工程 四、基因转移 第二节 细胞工程的应用 一、单克隆抗体的制备 二、生产药用蛋白 三、疾病的细胞治疗 退 出 首 页 Cell Engineering 第十八章 细胞工程 一、单克隆抗体的制备 单克隆抗体的概念：借助聚二乙醇将骨髓瘤细胞与分泌抗体的B淋巴细胞进行融合，得到杂交瘤细胞，由杂交瘤细胞产生的抗体即为单克隆抗体。 杂交瘤细胞特点： 如同骨髓瘤细胞那样无限生长； 如同B淋巴细胞那样分泌抗体。 退 出