干扰RNARNAi）作用机理及其在植物细胞工程中的应用进展.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００６，２６（９）：８４～９０ 干扰ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）作用机理及其在 植物细胞工程中的应用进展 １ １，２ 吴大利 　侯岁稳 （１兰州大学生命科学学院　兰州　７３００００　２中国科学院近代物理研究所　兰州　７３００００） 摘要　随着ＲＮＡｉ调控目的基因表达机理研究的深入，ＲＮＡｉ技术也发展为一种强有力的实验工 具，用来控制目的基因的表达以获取预期的生物表型。目前在植物中至少发现存在三种不同的 ＲＮＡｉ途径，这些途径中基因沉默信号可以放大、传递和自我调控。为了建立高效、经济的ＲＮＡｉ 技术体系，必须解决以下几个问题：即ＲＮＡｉ的有效传递，稳定性的提高，非目标效应出现的减小 以及目标ＲＮＡ敏感位点的确定等。综述了ＲＮＡｉ作用机制及其在植物细胞工程中的最新应用进 展，并详细探讨了其技术体系。 关键词　ＲＮＡｉ　基因沉默　植物细胞工程　技术体系 中图分类号　Ｑ８１３ 　　小分子ＲＮＡ的调控作用被评为２００２年度重大科 ｃｏｍｐｌｅｘ）结合。ＲＩＳＣ组分中的Ａｇｏ蛋白具有区分有义 ［１］ 链和反义链的作用，下一步具体作用机制现在还不清 学发现之一 ，它在生命发育调控及对外源基因“免 疫”过程中发挥着极其重要的作用。ＲＮＡｉ现象最早可 楚，可能活化 ＲＩＳＣ中的反义链，进而有助于启用一种 追溯到上世纪２０年代，Ｗｉｎｇａｒｄ等用烟草环斑病毒浸 甲基化酶 Ｃｌｒ４使 Ｈ３Ｋ９（ＨｉｓｔｏｎｅＨ３Ｌｙｓｉｎｅ９，Ｈ３Ｋ９） 染烟草叶片，发现再次受到病毒浸染时，植株表现出具 甲基化，最终导致染色体沉默，该过程称为 ＲＮＡ指导 ［２］ 的 ＤＮＡ 甲基 化 （ＲＮＡｄｉｒｅｃｔｅｄＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ， 有抵抗病毒的能力 ，之后人们慢慢认识到这种现象 ［５～９］ 背后的机理—ＲＮＡ引导的基因沉默。这种由ＲＮＡ引 ＲｄＤＭ） （图１）。 起生物体内基因沉默的现象，称为 ＲＮＡ干扰（ＲＮＡ １．２　转录后水平上的基因沉默 （ｐｏｓｔｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ，ＲＮＡｉ）。 ｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇ，ＰＴＧＳ） 　　此机制主要由一种具有２１～２５ｂｐ的双链ｓｉＲＮＡ引 １　ＲＮＡｉ作用机制 起。当生物体细胞遇到外源或内源长链 ｄｓＲＮＡ时，在 　　目前研究比较清楚且使用较多的基因沉默小分子 Ｄｉｃｅｒ酶或其类似物（Ｄｉｃｅｒｌｉｋｅ，ＤＣＬ）的作用下把长链 ＲＮＡ主要有 ｓｉＲＮＡ（ｓｈｏｒｔｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅＲＮＡ）及 ｍｉＲＮＡ ｄｓＲＮＡ切割成ｓｉＲＮＡ。ＲＩＳＣ在ＡＴＰ作用下活化，进而识 （ｍｉｃｒｏＲＮＡ）。它们分别在不同的水平上引导基因沉 别ｓｉＲＮＡ的反义链，降解有义链。活化后的ＲＩＳＣ通过 ［２～４］ 碱基配对对底物进行选择性识别，切割底物ｍＲＮＡ，造成 默 。 ［１０］ １．１　转录水平上的基因沉默 基因翻译水平下降，引起基因沉默 （图２）。 １．３　翻译水平上的基因沉默 　　这种机制是由ＤＮＡ启动子对立调节域转录成 　　作用分子ｍ