棉铃虫羧酸酯酶基因cDNA的克隆、表达及活性分析.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(4):730-737 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.04.010 棉铃虫羧酸酯酶基因cDNA的克隆、表达及活性分析 1 1 1,2 3 1 刘小民 ，李 杰 ，郭 巍 ，张 霞 ，李新娜 1 2 （河北农业大学植物保护学院/河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心，河北保定 071000 ； 河北农业大学生命科学学院，河北保定 071000 ； 3 河北省生物研究所，石家庄 050051 ） 摘要：【目的】克隆棉铃虫中肠羧酸酯酶基因，了解该酶的分子特性，为研究棉铃虫抗药性机理奠定基础。【方 法】制备抗血清，对棉铃虫（Helicoverpa armigera (Hübner)）中肠 cDNA 表达文库进行免疫筛选，得到编码棉 铃虫羧酸酯酶基因的cDNA克隆，利用生物信息学软件和网站进行序列分析，构建原核表达载体进行表达，并以α -醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明，羧酸酯酶基因hc3 （GenBank登录号：GU119888）全 长 2 896 bp，编码 795 个氨基酸。羧酸酯酶 HC3 的等电点 pI 为 3.94，活性中心包括 3 个氨基酸残基（催化三联 体）：Ser204, Glu331, His444；第545—773 位包含大量高度重复的Gly，Asp、Glu（GDE区域）构成亲水区。该 基因在大肠杆菌BL21中成功表达约100 kD的HC3蛋白，检测表达的羧酸酯酶活性为0.32 mmol/100 µL酶液。【结 论】成功克隆、表达了棉铃虫羧酸酯酶蛋白 HC3，并发现 GDE 亲水结构域。为进一步了解羧酸酯酶的三维结构及 其水解作用并设计新型杀虫剂提供了可能。 关键词：棉铃虫；cDNA表达文库；羧酸酯酶；活性分析 Cloning, Expression and Activity Analysis of Carboxylesterase Gene from Helicoverpa armigera (Hübner) 1 1 1,2 3 1 LIU Xiao-min , LI Jie , GUO Wei , ZHANG Xia , LI Xin-na 1 ( College of Plant Protection, Agricultural University of Hebei/Biological Control Centre of Plant Diseases and Pests of Hebei Province, Baoding 071000, Hebei ; 2 3 College of Life Sciences, Agricultural University of Hebei, Baoding 071000, Hebei; Biological