烟实夜蛾触角化学感受蛋白cDNA的克隆、序列分析及在大肠杆菌.pdfVIP

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2017-09-15 发布于重庆
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烟实夜蛾触角化学感受蛋白cDNA的克隆、序列分析及在大肠杆菌.pdf

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维普资讯昆虫学报 ActaEntomologicaSinica，October2006，49(5)：740—746 ISSNO454．6296 烟实夜蛾触角化学感受蛋白cDNA的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达蒋金炜，高素霞，安世恒，王琛柱 (1．河南农业大学植物保护学院，郑州 450002；2．中国科学院动物研究所，农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室，北京 100080) 摘要：利用 RT-PCR技术扩增了编码烟实夜蛾 Helicoverpaassuha触角化学感受蛋白(chemosensoryprotein)的全长 cDNA。克隆和测序结果表明，烟实夜蛾化学感受蛋白基因核苷酸序列全长 384bp(GenBank序列号：DQ285667)，编码 127个氨基酸残基，预测N一末端包含 16个氨基酸组成的信号肽序列，因此估测其成熟蛋白分子量为 12．97kD，等电点为5．32。将该基因重组到表达载体 pGEX-4T2中，并转入原核细胞中进行表达。SDS．PAGE和Western印迹分析表明，经 IPTG诱导后，烟实夜蛾化学感受蛋白基因能在大肠杆菌 BL21中表达，电泳检测到一条约 39kD的外源蛋白，与预测的融合蛋白分子量大小相符。关键词：烟实夜蛾；化学感受蛋白；基因克隆；测序；原核表达中图分类号：Q966 文献标识码：A 文章编号：0454—6296(2006)05．0740．07 CloningandsequencingofcDNA encodingachemosensoryproteininthe antennaofHelicoverpaassulta and itsexpression in Escherichiacoli JIANGJin—Wei，GAOSu—Xia，ANShi．Heng，WANGChen．Zhu (1．CollegeofPlantProtection，Henan AgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China；2．StateKeyLaboratoryofIntegratedManagementofPest InsectsandRodents，InstituteofZoology，ChineseAcademyofSciences，Beijing100080，China) Abstract：Theful1．1engthcDNA encodingaehemosensory protein (CSP)wasisolatedfrom theantennaof Helicoverpaassultabyreversetranscriptionpolymerasechainreaction (RT—PCR)．111isPCR fragmentwas furthercloned and sequenced．111e resultsshowed thatthe CSP gene in H ．assulta was384 bp in size (registeredinGenBankwiththeaccessionnumberDQ285667)andencoded127aminoacidresidues．TheN． terminushydrophobicregionpredictedcontainingof16aminoacidresidueswithintheHas—CSPdisplayedthe characteristicfeaturesofasignalpeptide．Thusthepredictedmatureweight(MW)is12．97kDandisoelectric point(IP)5．32．I11eCSPgenewasthenconstructedintotheexpressionvectorpGEX一4T2foroverexpression inprokaryotiecells．I11eSDS