玉米过氧化物还原蛋白BAS1的原核表达及其功能研究.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（１１）：２４２９ ? 玉米过氧化物还原蛋白ＢＡＳ１的原核 表达及其功能研究 程　雷　王蕾蕾　程备久　范　军 （安徽省农业大学省级作物生物学重点实验室 安徽农业大学生命科学学院　合肥　２３００３６） 摘要　植物过氧化物还原蛋白ＢＡＳ１是巯基依赖的过氧化物酶，通过催化的Ｃｙｓ残基还原过氧化 氢，依赖ＮＡＤＰＨ的叶绿体硫氧还蛋白还原酶保持 ＢＡＳ１的还原态。玉米含有两种 ＢＡＳ１：２Ｃｙｓ ＰｒｘＡ和２ＣｙｓＰｒｘＢ。利用ＲＴＰＣＲ方法从玉米幼叶中克隆了编码成熟２ＣｙｓＰｒｘＡ的基因，并将蛋 白Ｃｙｓ３４残基突变成Ｓｅｒ３４。ＳＤＳＰＡＧＥ显示纯化的野生型和突变体蛋白为一条主带，分子量约 为２３ｋＤａ；体外蛋白结合实验表明纯化的叶绿体硫氧还蛋白还原酶通过分子间二硫键结合纯化的 ２ＣｙｓＰｒｘＡ的Ｃ３４Ｓ突变体，非还原ＳＤＳＰＡＧＥ显示纯化的野生型２ＣｙｓＰｒｘＡ含有分子间二硫键 ? ? 组成的二体，而纯化的Ｃ３４Ｓ突变体呈现单体，巯基专一性标记化合物ＡＭＳ修饰及活性分析表明 纯化的ＢＡＳ１还原态是催化还原过氧化氢所所必须的，它由硫氧还蛋白还原酶及其辅酶ＮＡＤＰＨ 所催化。 关键词　过氧化物还原蛋白ＢＡＳ１（２ＣｙｓＰｒｘＡ）　叶绿体硫氧还蛋白还原酶　玉米　功能分析 中图分类号　Ｑ５５４＋．６ 　　植物叶绿体光合作用的电子传递链参与氧气的合 化和基态的再生。ＢＡＳ１的Ｎ端 Ｃｙｓ残基攻击过氧化 成，同时产生活性氧，包括过氧化氢，它既作为信号分 物底物，Ｃｙｓ残基的巯基被氧化成次磺酸衍生物，对于 子，对植物发育环境刺激产生响应，调节基因表达，又 Ｐｒｘ 和ＰｒｘＱ，它受到自身另一个 Ｃｙｓ残基攻击，产生 Ⅱ 可能在细胞积累产生羟基自由基，对细胞产生毒害作 含有分子内二硫键的单体，对于ＢＡＳ１，这种衍生基团 用。目前发现抗坏血酸过氧化物酶和过氧化物还原蛋 和另外一个ＢＡＳ１分子Ｎ端的Ｃｙｓ残基作用，形成分子 白（ｐｅｒｏｘｉｒｅｄｏｘｉｎ，Ｐｒｘ）负责清除过氧化氢的毒性。根据 间二硫键，产生头尾相连的氧化态二体。在二硫键的 催化反应的半胱氨酸残基数目将 Ｐｒｘ分为典型双半胱 形成过程中，释放一个水分子。Ｐｒｘ是不含有血红素的 氨酸型（２ＣｙｓＰｒｘ）、非典型双半胱氨酸型和单半胱氨 过氧化物酶，它必须依赖其它的电子供体来补偿辅基 酸型。植物叶绿体含有４种Ｐｒｘ，分别是 １ＣｙｓＰｒｘ，２ 的缺失，氧化的Ｐｒｘ没有活性，必须在催化循环中再生。 ［１］ ＣｙｓＰｒｘ，Ｐｒｘ 和ＰｒｘＱ ，其中２ＣｙｓＰｒｘ，又名ＢＡＳ１， Ⅱ 在体内，硫氧还蛋白ｘ和ｙ１，叶绿体干旱胁迫诱导蛋白 ［２］ 最早从拟南芥中克隆 ，是所有Ｐｒｘ中研究较为深入的 ＣＤＳＰ３２、亲环素蛋白Ｃｙｐ２０３和叶绿体依赖ＮＤＡＰＨ的 一个酶，它在不同植物中有不同的亚类，作为分子伴侣 硫氧还蛋白还原酶（ＮＡＤＰＨｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎｒｅｄｕｃｔａｓｅｆｒｏｍ 和调节蛋白，参与细胞氧化还原信号传导，蛋白折叠和 ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ，ＮＴＲＣ）催化氧化态ＢＡＳ１转化成还原态蛋 ［３］ 多种代谢途径的调节 。 ［１］