动力学因素对液相色谱分离整体蛋白的影响.pdfVIP

!# 年# 月 色 谱 ()*+ !$ ,)+ % !#$%’ !# !#$%% ’()*$+, (- !*(.+/(0*+1 2 $ $ ’ $!( 动力学因素对液相色谱分离整体蛋白的影响 闵, 一，, 陈, 刚，, 耿信笃! （西北大学现代分离科学研究所，现代分离科学陕西省重点实验室，陕西 西安 $ +# ） 摘要：依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实，研究了动力学因素对疏水相互作用色谱 （:; ）分离整体蛋白的影响。首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的“条件板高”（! ）概念，并将其用于 动力学因素对分离整体蛋白的影响的表征。分别用常用的色谱柱和色谱饼对标准蛋白进行了分离，绘制了类似于 =05 %$’ 的“条件板高”对流动相线速（ ）的曲线图。发现对应于色谱柱最低“条件板高”的适合线速约为色 谱饼的? % ’ ? % ，且色谱饼的适合线速范围也较色谱柱宽得多。据此，用装填有 :; 填料的色谱饼（ %% - ! %% 1+ 3+ ）在 ! %15 内便可完全分离$ 种标准蛋白。还用装填有:; 填料的色谱饼对重组人粒细胞集落刺激因子 （ ’@A/ !B ）进行了复性并同时纯化，在% %15 内，仅用一步色谱法就可获得纯度 #$C 的’@A/ !B ，其质量回收率 $ 为(#C ，比活 . - ) ;D? %4 。可以预计，装填极细颗粒的刚性色谱填料的色谱饼可在高负荷条件下进行整体蛋 白的高速和高分离度的分离、纯化并同时复性，达到“三高”。 关键词：疏水相互作用色谱；蛋白分离；分离度；色谱饼；动力学因素；生物工程；粒细胞集落刺激因子 中图分类号： E+%), , 文献标识码：F, , 文章编号：/)$ ( （!# ）%/$ $ /$, , 栏目类别：研究论文 !#$% ’()*+,$ *$%-. ) %/# -#.01%,) ,)%*$% 2-%#,) .#2*-*%,) 3( 0,41,’ $/-+*%5-*2/( G;, H1 ，:., A054 ，A.,A I1537 ! （#$% ’ ( )* + ),(-$ .(/ 0-0’)$ .1’($1( ，2 )- 34(% 5$’6(-%’7 ； .300$8’ 9 -)6’$1( : (7 ; 0)-0)-7 )* + ),(-$ .(/ 0-0’)$ .1’($1( ，= ’ ’0$ !##$% ，3’$0 ） 63.%-*$% ：J0K3 )5 $@ L08$ $@0$ $@ ’K)*7$1)5 )L 15$08$ #’)$15 K#0’0$1)5 1K 0*%)K$ 153#53/ 5$ )L 8)*7%5 *54$@ ，$@ LL8$ )5 $@ ’K)*7$1)5 L)’ 15$08$ #’)$15 K#0’0$1)5 807K154 L’)% 3M/ 50%18 L08$)’K 15 @M3’)#@)18 15$’08$1)5 8@’)%0$)4’0#@M （:; ）60K 15=K$140$3+ F 8)58#$ )L “8)531$1)50* #*0$ @14@$ ”（! ）L)’ #’)$15 K#0’0$1)5 1K L1’K$*M K744K$3 L)’ 8@0’0