蛋白质定向进化的研究进展.pdfVIP

《生物工程进展》2001 ,Vol. 21 ,No. 6 蛋白质定向进化的研究进展 肖志壮 　刘梦海 　汪天虹 　曲音波 ( 山东大学微生物技术国家重点实验室　济南　250100) 摘要 　定向进化是改造蛋白质分子的一种有效的新策略。主要是在实验室里模拟自然进化过程 , 通过由易错 PCR 、致突变菌株诱变等方法对编码蛋白质的基因进行随机诱变 , 由DNA 改组、随机引 导重组和交错延伸等方法进行突变基因体外重组 ,设计高通量筛选方法来选出需要的突变株。它 不仅可快速产生工业上有用的新酶 ,而且对研究蛋白质的结构与功能的关系具有非常重要的意 义。 关键词 　定向进化 　随机诱变 　DNA 改组 　随机引导重组 　交错延伸技术 ( ) 　　经过长时期的自然选择 , 自然界产生的无数蛋 通过不同途径 如随机诱变和大量筛选 成功地改造 [1 ] 白质表现出非常理想的生物学功能 。酶的催化效 了的酶 ,经常有一些氨基酸的变化是在根据蛋白质 率和专一性是大多数传统工业催化剂无法与之相比 模型预测的区域之外[2 ] 。当我们对所研究的蛋白质 的 ,因而 ,酶在各个领域中的应用越来越普遍 ,并将 分子结构了解很少时 , 定点突变就更是束手无策 继续迅速发展至下个世纪[2 ] 。然而 ,利用酶来设计 了[6 ] 。于是人们开始考虑似乎是非理性的方法 ——— 工业工艺的化学工程师们却经常遇到这样的难题 : ( ) [7 ] 定向进化 Directed evolution 。 酶经过数亿年的进化 ,在生物体内能完成非常特定 1 　蛋白质定向进化的基本思路 的生物学功能。但当它们处于机体外复杂的化学体 系中时 ,一些特征则不是人们所期望的 , 如产物抑 自然进化是在整个有机体繁殖和存活的过程中 制[3 ] 。生物工艺通常需要下列类型的酶:长时间内 [4 ] 自发出现的一个非常缓慢的过程 。自然选择使进 保持活性稳定的酶、在极端环境中保持高活性的酶 化向有利于生物适应生存环境的方向发展。环境的 ( ) 或可接受不同底物 包括自然界不存在的底物 的酶 多样性和适应方式的多样性决定了进化方向的多样 等[4 ] 。 性。我们可以在实验室中模仿自然进化的关键步骤 具有新的功能和特性的蛋白质可以通过两条途 ———突变、重组和筛选 ,在较短时间内完成漫长的自 径获得 :一是从大量未知的自然种系中寻找 ;二是改 然进化过程 ,有效地改造蛋白质[1 ] ,使之适于人类的 造现有已知的天然蛋白质或酶。对于在自然进化过 需要。与自然进化不同的是 ,这种策略具有明确的 程中没有经过选择的特性来说 ,后一条途径可能更 人为设定的目标 ,只针对特定蛋白质的特定性质 ,因 合适[5 ] 。八十年代初期 ,蛋白质工程技术应运而生。 ( ) 而被称为定向进化 directed evolution 。定向进化技 其基本概念是首先分析研究蛋白质的三维空间结