骨骼肌线粒体对不同训练方式的适应及其基因应答机制的研究.pdfVIP

论 文 摘 要 胰岛素抵抗是 2 型糖尿病、心血管疾病、肥胖症等多种代谢性疾病的前期表 现，而线粒体损伤和功能异常又是导致外周组织发生胰岛素抵抗的重要原因。骨 骼肌线粒体对长期运动的代谢适应被认为是运动预防冠心病、2 型糖尿病和肥胖 的关键因素。已有研究认为，骨骼肌线粒体的运动适应对运动方式、运动强度、 运动频率和持续时间有着较高的特异性和依赖性。线粒体的运动适应包括线粒体 生物发生、线粒体管网融裂、物质代谢与 ATP 合成等诸多变化。然而，骨骼肌 运动适应，尤其是线粒体对具体运动方式发生特异性适应的基因表达机制还鲜为 人知，与运动敏感性基因表达有关的调控因子还知之甚少。 目的：本研究分别建立以长时间、低强度为特征的耐力训练模型和以短时间、 大强度、间歇性为特征的冲刺训练模型，探讨、比较骨骼肌运动敏感性基因在长 期训练后的累积性应答特征，期望从基因表达水平阐释骨骼肌线粒体适应不同训 练方式的特异性，为运动预防代谢性疾病提供一些科学参考。此外，本研究也建 立了一种“ 以骨骼肌负载降低为主要特征” 的负对照生理模型——后肢悬吊，期望 以此模型探讨骨骼肌废用性萎缩的有关机理，辅证运动适应的相关结论。 方法：清洁级 Sprague-Dawley 雄性大鼠 40 只，随机分为 4 组，即安静组（C， n=10 ），后肢悬吊组（D ，n=8 ），耐力训练组（E ，n=10 ），间歇性冲刺训练组（S， n=12 ）。间歇性冲刺训练：每天9-10 次 10s 极量强度(≥42m/min) 的跑台运动，间 歇时间 30-60s ；耐力训练：每天30-60min 低强度(≤16.7m/min)的持续跑台运动； 每周训练 6 天，训练 8 周。后肢悬吊组在第 1-5 周与安静组饲养方式相同，在第 6-8 周实施悬吊，以悬尾方式保持后肢离地 1-2cm。最后一次训练结束后 24h ， 所有大鼠断颈处死。心脏取血，检测血糖、血浆胰岛素、瘦素、甘油三酯；取腓 肠肌检测丙酮酸、乳酸的含量以及己糖激酶（HK ）、丙酮酸激酶（PK ）、苹果酸 脱氢酶（MDH ）的活性，分离腓肠肌线粒体，检测柠檬酸合成酶（CS ）、羟脂酰 CoA 脱氢酶（HCD ）的活性；用实时荧光定量PCR 检测腓肠肌 GLUT4、AMPKα2 、 PDK4 、CPT-1β、PGC-1α、ERRα、NRF-2α、Mfn1 、Mfn2 、OPA1 、Drp1 、Fis1 的基因转录水平；用Western blot 测定腓肠肌线粒体 PDK4 、CPT-1β、Mfn2 、Drp1 的蛋白表达及细胞核PGC-1 、ERRα的蛋白表达；用ELISA 法（酶联免疫吸附试 - 4 - 验）检测腓肠肌线粒体和胞浆的细胞色素 c 的含量。 结果：（1）机体在两种运动方式和后肢悬吊的生理条件下，整体生理调节尚 处于稳态范围内，正常生理稳态未受干扰。耐力训练能显著降低血浆甘油三酯， 间歇性冲刺训练和后肢悬吊对血浆甘油三酯无显著影响，表明耐力训练与间歇性 冲刺训练在此有着不同的运动适应效果。 （2 ）耐力训练与间歇性冲刺训练对静息骨骼肌有着类似的丙酮酸提升效应， 但间歇性冲刺训练能提高静息骨骼肌的乳酸水平，说明间歇性冲刺训练很可能使 肌纤维在静息时的无氧代谢已经处于活跃状态。耐力训练、间歇性冲刺训练和后 肢悬吊对静息骨骼肌 HK 、PK 、MDH 、HCD 活性没有显著影响，但间歇性冲刺 训练导致 CS 活性增加。 （3 ）健康机体GLUT4 mRNA 表达对于耐力训练并不表现敏感。间歇性冲 刺训练能诱导 GLUT4 mRNA 表达上调。耐力训练后骨骼肌 AMPKα2 mRNA 表 达下调，可能是 AMPK 信号通路活性对耐力训练适应性下调的一种表现。耐力 训练对 CPT-1 的基因转录和蛋白表达均无显著作用，对PDK4 也仅仅只在转录水 平有下调作用。间歇性冲刺训练在基因转录和蛋白表达两个水平都导致 PDK4 下调。后肢悬吊与间歇性冲刺训练对 PDK4 、CPT-1 基因表达的调控方向一致。 （4 ）后肢悬吊、耐力训练、间歇性冲刺训练对NRF-2α mRNA 表达均无显 著作用。PGC-1 、ERRα 的基因转录和核蛋白表达并不具有同步性。耐力训练和 间歇性冲刺训练都可能诱导了PGC-1α、ERRα基因的“转录节省化”效应。PGC-1 与 ERRα 的核蛋白