实习二电离辐射细胞存活克隆实验结果分析.docVIP

放射生物学 实习二 细胞克隆（集落）（集落）efficiency)；2，应用SPSS软件测算单击多靶模型下细胞存活曲线的n、k估计值，评价模型曲线的拟合优度；3，根据n、k估计值进一步计算D0、Dq和D37等参数，以及某一化学增敏剂或处理因素的增敏比(SER, sensitive enhancing ratio)；4，利用EXCEL软件绘制细胞存活剂量效应的模型曲线。 实验原理 放射生物学中细胞受电离辐射照射后，受照细胞照细胞形态仍然保持完整，制造蛋白质合成DNA，甚至再一次或次有丝分裂克隆（集落）克隆（集落）培养细胞分裂增殖成细胞群体。人宫颈癌人宫颈癌 各照射处理组平均细胞存活分数（SF）实际为各组细胞克隆形成的平均数除以相应细胞接种数与接种效率的乘积。 四、细胞存活曲线拟合、参数计算与曲线绘制方法 SPSS软件数学拟合，给出模型中k和n估计值 大致步骤如下：计算、整理不同辐射吸收剂量D照射下细胞相应组的细胞平均存活分数SF（校正接种效率后的平均存活分数，这是第一步），手填写成剂量D与存活分数SF的纸质二维表格； 启动SPSS, 定义变量名SF显示精度4位数输入数据差平方和单击多靶模型: 利用EXCEL软件绘制细胞存活曲线 绘制过程大致步骤如下：启动EXCEL软件，建立辐射剂量D和细胞存活分数SF的理论预测值预测值衣霉素衣霉素tunicamycin，Tun）是由放线菌Streptomyces lysosuperficus）产生的核苷酸抗生素在天冬酰胺糖蛋白糖链生物合成中，衣霉素抑制N-乙酰葡萄糖胺-1-磷酸转移到脂质载体上。甘氨双唑钠(CMNa)是我国创的硝基咪唑类化合物甘氨双唑钠甘氨双唑钠衣霉素宫颈癌衣霉素μg/ml Tun预处理8h后加电离照射，Tun组；和（3）200μg/ml CMNa预处理30min后加电离照射，CMNa组。实验结果如下附表。 附 人宫颈癌接种数 Dose(Gy) CTR Tun CMNa 600 0 414 375 405 461 438 435 396 397 408 600 0.5 314 372 319 363 361 297 296 323 291 600 1 291 317 287 325 354 249 267 324 237 1000 2 244 295 187 284 322 195 276 341 226 4000 4 214 338 215 253 392 178 235 327 187 8000 6 123 323 75 174 282 87 161 278 119 10000 8 67 260 47 93 277 38 78 252 57 六、实习目标与思考题 实习目标 1、计算各组细胞受照剂量下，不同处理组实际平均细胞存活分数； 2、利用SPSS软件根据单击多靶数学模型拟合剂量与存活分数之间的关系，进一步得到不同处理组细胞存活曲线中k、n估计值，据此再求出不同处理组相应D0、Dq和D37参数。注意各组实验细胞存活曲线拟合优度的检验； 3、计算Tun和CMNa预处理后，各自与对照组相比的辐射增敏比SER。根据CMNa预处理组SER值判断本次细胞存活曲线实验是否成功（标准是SER大于1），再根据Tun预处理组SER值决定衣霉素是否具有抵抗电离辐射的作用； 4、根据不同处理组细胞存活曲线中k、n估计值和单击多靶数学模型，利用EXCEL软件计算出各组细胞克隆存活分数预测值；根据存活分数预测值和照射剂量绘制细胞存活曲线，并描出各实测细胞克隆数以及相应D0、Dq和D37参数值数据点的位置。 5、请用书面形式回答以下思考题。 思考题 1、本实验在证明衣霉素抵抗电离辐射能力的设计上尚存哪些不足，为什么？设计上要补充哪些实验内容可以支持你的观点，为什么？ 2、放射生物学中单击多靶数学模型与线性二次方数学模型推导过程各自所依据的主要理论是什么？本实验结果如果改用线性二次方数学模型进行结果处理，将会出现什么样新的实验结果与结论，为什么？ 3、什么叫电离辐射的亚致死性细胞损伤修复？请详细讨论亚致死性细胞损伤修复与细胞增殖性死亡之间的关系。 七、参考文献 [1] M. Verheij, H. Bartelink, Radiation-induced apoptosis, Cell Tissue Res 301 (2000) 133-142. [2] T. Sanli, C. Liu, A. Rashid, S.N. Hopmans, E. Tsiani, C. Schultz, T. Farrell, G. Singh, J. Wright, T