粟酒裂殖酵母编码Trna3末端加工酶基因trzl回复突变基因研究.pdfVIP

摘要 摘要 是够催化前体形成成熟的。末端的的核酸内切 酶,通过去除前体’末端非编码 ’端多余序列来完成。 属于 金属一一内酰胺酶超家族,第一个的基因在年被克隆,随后, 家族也不断的被人们所认识。人类 基因的突变会提高患前列 腺癌的风险。本实验尝试运用裂殖酵母模式生物对人前列腺癌易感基因 的进化和功能方面进行研究。 粟酒裂殖酵母 中含有两种 基因: 』砂和.,它们编码的蛋白分别定位于细胞核和 线粒体中。本课题组已经证实两种 都是必需基因。本实验主要是对与 和有相互作用的基因进行筛选和确定。在真核生物中,对粟酒 裂殖酵母进行遗传操作的简便性仅次于芽殖酵母,这使得其成为进行细胞周期调 控、有丝分裂和无丝分裂、修复和重组研究的模式生物。 本实验室已经构建了在。表现致死表型的勋的温度敏感型菌株 ,和的温度敏感型菌株来 进行基因相互作用研究,希望通过这些研究对相关的人类癌症的了解提供一定的 帮助。印眈的温度敏感型菌株可以被人和芽殖酵母互 补抑制℃致死表型,表现了它们的功能保守型。进一步的实验发现,在。 情况下,本该致死的的温度敏感型突变菌株发生自发回复突变,有极少量能 回复到野生型的表型,经实验确定,回复突变率大约为.一。裂殖酵母 温度敏感突变菌株的回复突变菌株,可以抑制温敏型菌株。致死表型, 为了探究是何种原因引起了这一回复表型,我们对该菌株的基因及其上游启 动子序列进行了鉴定,证明没有发生突变后,我们对回复突变菌株进行了全基因 组测序,全基因组测序覆盖率为%,覆盖深度.。我们将温度敏感菌 株的回复突变菌株全基因组测序结果,与 一基因组对比之后, 得到个有义点突变,共个基因发生突变,我们对其中个感兴趣的基因做 了鉴定和救活实验但是最终没有救活温度敏感菌株。 本实验发现在高表达的情况下,会令野生型酵母细胞有致死毒性。为 了探究体内是否存在功能上与有互补作用的蛋白,我们尝试从粟酒裂殖 酵母的文库一含有基因酒精启动子和终止子,含 有×’克隆,%装载了或者更多的插入序列中筛选勋高表达致 死表型的高拷贝抑制基因的遗传学研究方法,从而筛选得到与姚相互作用 的基因。 本实验共得到个可以救活印高表达致死菌株的文库质粒。但是经测摘要 序发现其中个质粒同时含有和质粒部分,经测序发现,这 个质粒发生了融合,并且印被替换成基因。 关键词:, ,温敏菌株,高表达致死,抑制基因 , ??. . , . 矿.,匆 印印. , ,, , , ? , 口功 .. ? ,?。. . . ,.?% .. , , .?, 口. ? . 、 :, ,, 垒堕竺?? , 目录 目录 ?.??.??. 摘要? .?..?.??.? Ⅱ , 第章综述?.前体’末端的加工....??.: .的结构与功能研究? .的两种类型.. 结构和功能 与疾病的关系.粟酒裂殖酵母是研究基因相互作用的理想模式生物. 裂殖酵母温度敏感型菌株及回复突变. ;巧巧■ .粟酒裂殖酵母全基因组测序方法 墙 第二章裂殖酵母温度敏感菌株回复突变基因研究.材料与方法??.?.?.?.. 材料..培养基. 。.实验方法?. .实验结果??.. . 回复突变菌株基因及上游启动子鉴定. 回复突变菌株全基因组测序及基因救活实验结果? ..回复突变菌株基因组测序结果? .讨论??.??.?....?... 灌心急加扒姐弭巧 弱 第三章抑制高表达致死表型的基因的筛选. .实验材料....菌种及质粒. 培养基及储存液一 ..主要试剂及耗材 实验方法?.....??.?. ..高表达致死菌株的获得.. 文库质粒转化/.通过影印消耗维生素,使其表现出致死表型. ..提取阳性转化子基因组,电转化获得能救活的文库质粒 实验结果及分析?. . 影印后结果.质粒酶切电泳图谱.测序结果及分析? .. 测序结果? ..测序结果及酶切验证结果??.. 弱玎弱弱”””弘珀弧弛如”乾钙卯 .讨念.?目录 第四章检测已知的候选基因对温敏菌株的救活作用.材料与方法 ..材料..?... .方法??.结果?. .. 的基因存在额外的突变位点.. 和都无法救活?.. . 的突变位点的确在??.未发现转入的质粒能弥补温度敏感缺陷表型 讨仑??.?... 参考文献附录一主要仪器? 附录二本实验所用的酵母菌株?. 附录三本实验所用的质粒附录四本实验所用的引物??. ∞∞∞∞铉铉记弱舛舛%矾以弼硒朋 致谢.第一章综述 第章综述 与核酸、蛋白质有着紧密的联系,参与生命活动中的氨基酸转运和翻 译过程,在生物体中具有极其重要的作用,它的研究至今仍然是分子生物学中一 个重要而且活跃的研究领域】。姐分子在蛋白质合成过程中起着非常重要的 氨基酸运输和识别作用,在所有生物体中都是最为重要的过程之一。在所有的生 物体内,分子首先以前体形式转录而成,经过一