苜蓿抗感褐斑病品种内超氧化物歧化酶, 过氧化物酶和多酚氧化酶活性的对比.pdfVIP

维普资讯 1OO一 1O4 ACTA PRA草TA业CUL学TUR报AESINICA N。2． 6／2002 苜蓿抗感褐斑病品种内超氧化物歧化酶、 过氧化物酶和多酚氧化酶活性的比较 袁庆华，桂枝 ，张文淑 (中国农业科学院 畜牧研究所 ，北京 100094) 摘要 ：利用离体叶接种技术分别将伊鲁瑰斯、沙河 、萨兰斯和沙湾 4个苜蓿 品种 内的植株分为抗病株和感病株 ，并 分别接种苜蓿假盘菌，对抗 、感病植物叶片中的SOD、POD及 PPO的活性进行了测定。结果表明，接种前抗、感株叶 片中4种酶的活性基本相同，接种后 17d内酶活性先升后降，而抗病株的酶活性增加高于感病株。最后抗 、感病株 3种酶活性趋于一致 。 关键词 ：苜蓿 ；褐斑病 ；超氧化物歧化酶 ；过氧化物酶 ；多酚氧化酶 中图分类号：$432．1 文献标识码：A 文章编号 ：1004—5759(2002)02—0100—05 大量的研究结果表明，超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)及多酚氧化酶 (PPO)都在植物的抗病过程 中起着重要的作用口 ]。许多研究者认为，植物体内有一组保护酶系统 (SOD、POD及PPO)，在未受到病菌侵染 前使活性氧处于低水平的动态平衡状态；当植物受到病原菌侵染后，被侵组织的活性氧突增 ，而该保护酶系统具 有清除活性氧，防止植物受害的作用口 川。 以往对不同作物接种病菌后保护酶的活性作了大量的实验研究口q ]，以探讨保护酶与寄主抗病性的关系， 作为筛选抗性材料的生化指标之一。但是，对于同一品种内，特别是同一牧草品种内不同抗、感植株的保护酶变化 的研究尚不多见。笔者和我国其他人员 州曾对苜蓿品种抗褐斑病的特性分别开展过室内与 田间的特性评价 。在 以往工作的基础上，笔者通过离体叶接种口 ，已经从同一品种内600个单株中筛选出抗病单株和感病单株 (待 刊)。在此基础上，通过苜蓿假盘菌的接种，对抗、感株进行保护酶活性测定，以比较抗、感株酶活性的变化动态，对 离体叶接种的有效性做进一步检验，并为苜蓿抗褐斑病育种提供理论依据。 1 材料与方法 1．1 实验材料 1．1．1 供试品种 选用 4个苜蓿品种，即伊鲁瑰斯、沙河、萨兰斯和沙湾 ，它们的病指数分别为 13．48、21．48、 28．25和 33．68。用离体叶接种方法口从每个品种600株中筛选出最抗的和最感的苜蓿单株各5株，进行无性扦 插扩繁，取扩繁后的备品种抗感单株各30株，作为供试材料。 1．1．2 菌种与取样方法 苜蓿假盘菌(Pseudopezizamedicaginis)在V一8碳酸钙琼脂培养基上培养，20nC恒温 黑暗条件下培养 30d，按袁庆华等_8的方法接种病菌，分别于接种前 1d，接种后 2、7、12、17d对抗感单株逐株取 相同部位的一个叶片，将同一抗病或感病单株的叶片放在一起，并用去离子水冲洗干净后，用于制备酶液。 1．2 实验方法 1．2．1 酶液提取 称取 0．5g去中脉的苜蓿叶片，放入研钵 中，取 5ml1／15mol磷酸缓冲液(pH一7．8)倒入研 钵 内，冰研磨成匀浆，6000r／min离心20min，倾出上清液 ，放入 5ml试管内，剩余物加少量缓冲液冲洗后，再次 离心(6000r／min，5min)，取上清液，如此重复3次，直到酶粗提液补足5ml。将酶液放入4℃冰箱中保存备用。 以上方法用于 SOD、PPO酶液的提取，而 POD酶液的提取使用的是 0．01mol／L磷酸缓冲液 (pH一7．2)，其 余方法 同上。 收稿 日期：2001—08—07 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目(编号。 作者简介 ：袁庆华 (1959一)，女 ，天津人，副教授。 维普资讯 第 11卷第2期 草业学报 2002年 1O1 1．2．2