柱前衍生化高效液相色谱法探究多糖中的单糖组成.pdfVIP

( ) 第 30 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究简报 第 6 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2002 年 6 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 702～705 柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成 马定远　陈　君　李　萍 胡卓逸 ( 中国药科大学生药药用植物教研室 ,南京 210038) ( 中国药科大学生化研究室 ,南京 210009) 摘 　要 　报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。采用反向高效液相色谱 250 nm 紫外 检测和使用梯度洗脱 ,6 种还原单糖的 1苯基3甲基5吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。 对单糖组成的定量测定进行了方法学考察 ,建立了单糖组成分析的数据分析方法 ,并用所建立方法对一个多 糖中的单糖组成进行了分析 ,获得良好的重复性。 关键词 　单糖 ,多糖 ,衍生化 ,高效液相色谱 1 　引　　言 单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色 谱法为主。由于单糖分子的多样性 , 关于糖的分析方法仍在不断发展。1苯基3甲基5吡唑啉酮 ( ) 1 ～3 。Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分 PMP 衍生化方法自运用以来 ,得到不断完善 2 ( ) 析 ,可以使 15 种单糖得到很好的分离 。本文首先建立了 6 种常见单糖 包括一种酸性糖 的分离模 式 ,通过内标法对 3 种中性单糖的定量进行了方法学考察 ,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了 组成分析 ,为此法的更好运用提供了依据。 2 　实验部分 2 . 1 　仪器与试剂 HP1100 型高效液相色谱系统 ,包括 G1312A 二元泵 , G1315A DAD 检测器 ,HP ChemStation 色谱工作 ( ) 站 HewlettPackard 。 ( ) 衍生化试剂 1苯基3甲基5吡唑啉酮 PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂 , 甲醇重结晶两次。 ( ) ( ) ( 色谱用乙睛 Tedia 、三氟乙酸 CP 级 ,上海化学试剂公司 。单糖对照品:葡萄糖 Glc ,上海化学试剂公 ) ( ) ( ) ( ) ( ) 司 、甘露糖 Man ,Sigma 公司 、半乳糖 Gal ,Sigma 公司 、鼠李糖 Rham 公司 、葡萄糖醛酸 GlcUA 和木 ( ) ( ) 糖 Xyl 上海化学试剂二厂产品 。其它试剂均为分析纯。 多糖样品 : Fs - B 由本室分离纯化, TSKgelG3000SWXL 鉴定为双峰 ; FsA1 由本室分离纯化, TSKgelG3000SWXL 鉴定为单峰。 2 . 2 　衍生化标记 将待测样品置于 1 mL 具塞试管中 ,加或不加内标溶液 ,室温减压真空