cu2+ 对红豆杉培育细胞中紫杉醇形成的影响.pdfVIP

维普资讯 第 18卷 第 2期 华 中 农 业 太 学 学 报 v01．18 No．2 1999年 4月 JottmalofHuazhongAgriculturalUniverslW Apt． 1999 ff7一f Cu2+对红豆杉培养细胞中紫杉醇形成的影响 ／ S7{|·{ 李家儒 管志勇 ’ 刘曼西 吴振斌 ’ 王君健 ) ／ (中国科学院水生生糟研完所 ．武汲 430072：埠 中理工大学生特工程系 武汲 430074) 摘要 用 CuF 对红豆杉 (了 chinensis)培养细胞中紫杉醇形成的影 响进行了研究。在红豆杉细胞悬浮 培养20d即指数生长期末 ，每 1L细胞悬浮培养物 中加入 30t~aolCuCI2，c 促进紫杉醇形成的作用最大。添加 C~C12对红豆杉细胞生长没有明显影响 ，但引起培养细胞 中可溶性蛋 白质古量、苯丙氨酸解氨酶活性及培养基 pH值的变化。 ， 关麓词 诱导于；红豆杉；细胞培养；紫杉醇 工上 中圈法分类号 Q946．851 紫杉醇是从红豆杉属植物中提取的一种复杂的 相应于接种量为 10g的细胞干重 ，以此作为细胞生 二萜类物质 ，已被美国食品与药物管理局 (H)A) 长指标 。 批准用于卵巢癌、乳腺癌的治疗，对其它癌症的治疗 1．3 紫杉醇含量测定 也显示 良好的前景 。红豆杉生长缓慢 ，天然资源破 按参考文献 [2]方法进行 ：精确称取粉碎的干细 坏严重 。有限的 自然资源和对紫杉醇 日益增长 的需 胞培养物，甲醇浸泡 96h，经 0．22u,m滤膜抽滤，滤 求促使人们纷纷开发经济、可靠的紫杉醇替代资源 。 液供高 效液相 色谱 分析。使 用 Noval：~kC-18柱 红豆杉细胞培养生产紫杉醇有可能成为解决紫杉醇 (3．9mmx150nlrn)，流动相为 甲醇 ：水(75：25)，流 药源危机的一条重要途径 ，近年来 已取得 了较大进 速 0．5mlfmin．柱温 25℃，检测波长 227nm。进样 展… 。 量 3 ，每处理重复2次，取其平均值为该处理紫杉 笔者 曾报道在红豆杉培养细胞 中添加桔青霉 醇含量 。紫杉醇标准品得 自美国国立癌证研究所 (NCI)。 (Peniciltiumcitrinum Thorn)诱导子L及前体物对 紫杉醇的促进作用，在原有工作的基础 i-[2,3J，本研 1．4 红豆杉细胞中可溶性蛋白质含■毒I定 按考马斯亮蓝G25o法L ，以小牛血清 白蛋 白 究探讨 了C 对红豆杉 [Tazuschinensls(Pilger) 为标准 。 Rehd]培养细胞 中紫杉醇形成的影响。 1．5 苯丙氨馥解氨酶 (PAL)活性测定 1 材料与方法 参照参考文献[6]的方法，称取 2g样品于 1Ond 1．1 红豆杉细胞悬浮培养 预冷的硼酸缓冲液 (pHS．8)(内含 5rTⅡmI几 疏基 乙 供试材料红豆杉 [T．chinensis(Pilger)Rehd] 醇)中冰浴 匀浆，匀浆液^ 10 离心管中，2s00r／ 单细胞克隆系TC158，为笔者建立和保存的一个普 rain。离心20rain，收集上清液定容至 1O ，即为粗酶 通细胞系。培养基为：MS+0．5mg／LNAA+0．5 液，检测反应液组成 ：O．2rrtal几 硼 酸缓冲液 2 ， mg／LBA+2g／LCH+25