微血管内皮细胞的分离和培育.pdfVIP

中国微循环2002 年 2 月第 6 卷第 1 期 ·59 · ( ) 文章编号 : 1007 - 8568 2002 01 - 0059 - 03 ·综述 · 微血管内皮细胞的分离和培养 梁光波 , 金惠铭 中图分类号: R322. 1 + 3 文献标识码 : A 血管内皮细胞密切参与包括再生、发育、伤口愈合 ) 精细的组织 ,只需 30min 就可消化彻底了。 等一系列生理过程及炎症反应、糖尿病生物膜病变、肿 1. 2 纯化 由于酶消化范围较大 , 分离的内皮细 ( ) 瘤侵袭等病理生理反应 Folkman ,1992 。为了对内皮细 胞常被成纤维细胞等污染。成纤维细胞生长较内皮细 胞的功能有更多了解 , 人们对人及动物内皮细胞的培 胞快 , 可将后者迅速覆盖。因此 , 必须采取一些纯化方 养进行了探索。近年来 ,血管内皮细胞的培养已从大血 法 ,使内皮细胞高纯度的发展起来。根据是否需特殊试 ( ) 管 主动脉、脐静脉 内皮细胞发展到微血管内皮细胞 剂和仪器将其分为简单纯化法和复杂纯化法。 (MECs) 。MECs 的分离和培养在认识正常的血管生成 1. 2. 1 简单纯化方法 ①将组织分离后得到的细 和实体瘤血管新生、炎性细胞的迁移及血管病理生理 胞悬液进行过滤和离心。用 150～200 m 及 70～100 m μ μ 等过程中发挥了关键作用。 孔径的网可分别筛去未消化的组织和一些较大的细 MECs 因器官功能不同而有不同的异质性, 如其形 胞。血细胞等比 MECs 小的细胞及一些碎片可用孔径 态、抗原表达及对生长因子的反应等。在研究中最好是 20 m 的网滤去。离心可将密度差异大的细胞初步分 μ 用参与病变的组织或器官的 MECs 。本文搜集了一些文 开 ,还可用于洗涤细胞。根据情况交替使用过滤和离心 献中常用的 MECs 培养方法 , 并对其进行了分析 , 为有 方法即可得到含 MECs 比例较高的细胞悬液。②用尼龙 关的研究提供参考。 或钢丝网过滤分离的细胞以减少刚消化好并将要首次 1 微血管内皮细胞的分离纯化 接种的细胞中的污染细胞。网孔大小可允许内皮细胞 1. 1 分离 MECs 的分离中会遇到脐静脉血管内 通过而滞留污染细胞。③物理刮除法或更换培养液法 皮细胞分离过程中没有的困难。MECs 大多是在剪碎或 MECs 接种和贴壁后所呈现的铺路石样形态可供识 ( ) 使其匀浆化后 非酶法 与蛋白水解酶共培养不同的时 别。但污染细胞同样可以贴壁。为了不让 MECs 被覆盖 , ( ) 间 酶消化法 后分离出来。 整个过程中要对 MECs 的形态进行辨别 ,这可能是比较 ( ) 1. 1. 1 非酶法 : 主要有 1 用宽缝匀浆器匀浆 ; 困难的 , 尤其有大量污染细胞存在时。另一个困难是 ( )