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农业生物技术学报 Journal ofAgriculturalBiotechnology 2009,17(6): 1020~1026
·研究论文 ·
棉花农杆菌基 因转化体系的优化和转苜蓿
抗菌肽基因 （ ） 植株 的获得 *
1,2 , 1 **, 1 , 1 , 1 , 1
张海平 王学德 邵明彦 袁淑娜 华水金 倪 密
(1. ， 杭州 310029 2. ， 太原 030031
浙江大学农业与生物技术学院农学系 ； 山西省农业科学院农作物品种资源研究所 ）
( ) （ L. ，
摘要：为 了优化根癌农杆菌 介导 的棉花 ） 下胚轴切段 的基 因转化体系
（ （ ， 利用
以苜蓿 L.） 抗菌肽基因 alflafa antifungulpeptide , ） 为目标 葡萄糖甘酸酶基 因 ( )和潮霉素抗
茁
、 共培养 中乙酰丁香酮 （
性基 因( )的检测方法 ， 分析 了根癌农杆菌菌种 、 菌液浓度 、 浸染下胚轴 的时间 AS） 的浓度 、 共培养温
度和时间等 因子对基因转化的影响。 优化分析表明， 用农杆菌菌株 LBA4404,当 值为 0.5 0.7 的菌液浸染 5 7 日龄的棉
～ ～
600
花无菌苗下胚轴切段 10 15min， 在含 200 mol/LAS 的共培养基中 21 暗培养 60h， 可更有效地提高转化率。 经上述条件处
～ 滋 ℃
理的下胚轴在含 50mg/L潮霉素 的愈伤诱导培养基上培养 3周可产生转化率最高的愈伤组织 。愈伤组织经分化培养获得 15
PCR PCRSouthern
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