温度对淡紫拟青霉NH-PL-03菌株生长特性及毒力的影响.docVIP

温度对淡紫拟青霉NH-PL-03菌株生长特性及毒力的影响 李芳1 刘波2×黄素芳2 陈家骅1 （1福建农林大学植保学院 350002 ; 2福建省农科院生物技术中心 350003 ） NH-PL-03菌株在不同温度条件（15℃-35℃）下，培养过程OD 值、pH值、菌丝干重、孢子量、基质消耗（C、N）以及培养液对线虫的毒力。试验结果表明：温度对发酵的影响是多方面的，在一定范围内（15℃-30℃），生长速度与基质消耗（C、N）速率随温度升高而升高，35℃时，菌生长处于明显抑制状况。20℃-25℃为最合适的生长温度。30℃时毒力最高。 关键词：淡紫拟青霉；温度；菌丝干重；孢子量；基质消耗（C、N） 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： 淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus (Tham) Samson）作为一种重要的生防菌，有过大量研究报道[1～3]。王明组研究了淡紫拟青霉的生长与产孢条件，研究结果表明最适于此菌生长与产孢的温度条件是25℃～30℃。最适pH为5～9。PSD（Potato Sucrose Agar）ioretto-AMC研究了5℃～35℃条件对此菌生长的影响。24℃～25℃为最佳生长温度。生长阈值为-10.9℃。低温适合于菌的贮存[5]。温度是影响菌体生长的重要因子。温度对真菌产物合成及代谢的影响是多方面的，不仅可以改变培养液的性质，而且会影响细胞代谢过程中各种关键酶的活性[6]。本研究设置5个系列温度（15℃、20℃、25℃、30℃、35℃）从6个不同侧面（OD值、pH值变化、菌丝量、孢子量，对茎线虫毒力,C,N含量）来综合考察温度对淡紫拟青霉生长的影响。以淡紫拟青霉淡紫拟青霉NH-PL-03菌株在不同培养温度条件下，发酵过程的OD值、PH值、菌丝重量、孢子量、含氮量、含糖量为指标，以培养时间为样本，应用DPS数据处理平台 [7],构架数据矩阵，聚类分析不同温度条件下，淡紫拟青霉菌株NH-PL-03培养性状。结果总结如下： 1 .材料与方法 1.1 试验材料 供试菌株：淡紫拟青霉NH-PL-03菌株，从染上根结线虫的番茄根围分离得到。供试线虫：甘薯茎线虫（Ditylenchus destructor）由农科院生物技术中心农业环保技术研究室提供。 1.2 试验方法 1.2.1淡紫拟青霉NH-PL-03菌株的培养：培养基配方，马铃薯200g，蔗糖20g，水1000 ml。培养条件，每瓶(250 ml)装50ml培养液，用接菌环挑取一环新鲜孢子于每瓶培养基中，恒温摇床温度设置为15℃、20℃、25℃、30℃、35℃，转速为110 r/min，培养24h后开始取样检测。 1.2.2淡紫拟青霉NH-PL-03菌株培养过程参数变化动态：菌株培养方法同1.2.1。每24h取样1次，每次取样3瓶，8000 rpm离心10 min，取上清液做OD和pH值分析；OD值测定，751分光光度计，波长620nm；pH值测定，pHS-25酸度计（上海雷磁仪器厂）。菌丝干重测定，每24h取样1次，每次3瓶，从三角瓶中倒出所有菌液，滤过双层纱布，烘干，称重。产孢量测定，每24h取样1次，每次3瓶，采用血球计数法，在显微镜下取30个视野，计数孢子数，取平均值。总氮量检测采用凯氏定氮法 [8]。总糖测定采用3,5-二硝基水扬酸法[8]。对线虫毒力测定：甘薯茎线虫毒力的测定，带线虫的甘薯切成0.15-0.19g小块，分别浸泡于5ml不同温度设置、不同培养时段（2~8d）的NH-PL-03菌液中，置于25oC恒温箱中，24小时后测定二龄线虫死亡率，设一清水对照。 1.2.3 数据分析 采用DPS数据处理系统，将实验数据进行标准化处理，以欧氏距离为尺度，用类平均法进行系统聚类。 2 结果与分析 2.1.对OD值的影响： 图1.温度对淡紫拟青霉发酵过程OD值的影响 Fig 1 Effect of temperature on OD value(right:cluster analysis result) 实验结果见图1，总体上OD值随时间推延而上升，在15℃～30℃范围内OD值的上升速率与温度成正比，从OD值变化情况看，初期OD值上升缓慢，随后OD值明显跃升，第10~11dOD值达到峰值，以后有所下降。30℃条件下OD值上升速率最快,4d后进入对数期，OD值从0.043上升到最高值2.510，在6d内增加58倍，其次为25℃，OD值5d后进入对数期，第10d达到峰值1.18。15oC条件OD值变化幅度明显减弱，35oC条件OD值上升很大程度是由于菌液挥发浓缩引起的。应用DPS数据处理平台，分析以上数据，结果表明，当λ=0.881时，可将培养温度对OD值的影响分成四类，15℃和3