脂蛋白酯酶的分离纯化及其部分性质研究.pdfVIP

第２５卷第６期 四川理工学院学报（自然科学版） Ｖｏｌ２５　Ｎｏ６ ２０１２年１２月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｉｃｈｕａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｄｅｃ２０１２ 文章编号：１６７３１５４９（２０１２）０６０００１０５ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３１５４９．２０１２．０６．００１ 脂蛋白酯酶的分离纯化及其部分性质研究 ａ ｂ ｂ ｂ 何义国 ，赵兴秀 ，邓 静 ，吴华昌 （四川理工学院ａ．化学与制药工程学院；ｂ．生物工程学院，四川 自贡 ６４３０００） 　　摘　要：将Ｃａｎｄｉｄａｒｕｇｏｓａ用橄榄油诱导培养，所得上清液依次经过截留分子量１００００中空纤维柱 浓缩，８５％硫酸铵沉淀，然后经过ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦ．Ｆ．离子柱和ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱进行交换 层析和疏水层析，得到了活力达６０４Ｕ／ｍｇ的脂蛋白酯酶，纯化倍数和回收率分别为１３８倍６６％。所 得纯化酶经还原和非还原ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析为单一蛋白染色带，ＨＰＬＣ显示纯度为９５％以上。该酶的最 适温度为４０℃～５０℃之间，最适ｐＨ为７５，具有较强的热稳定性和酸碱稳定性，在最适温度和ｐＨ条件 －４ 下该酶Ｋｍ值为３４×１０ ｍｏｌ／Ｌ。 关键词：脂蛋白酯酶；假丝酵母；脂蛋白酯酶性质 中图分类号：ＴＱ９２０６ 文献标志码：Ａ 　　近年来，随着我国居民饮食结构的逐渐改变，糖尿 １ 材料与方法 病、高血压、冠心病、高脂血症、肥胖症和其他富裕性疾 ［１］ １１ 材料 病的发病率大幅度提高 ，引起了全社会的关注。高脂 血症是心脑血管疾病的罪魁祸首，在中国约９０００万人 １１１ 菌种与培养基 ［２］ 皱褶假丝酵母由ＡＴＣＣ提供。 患高脂血症 。因此，加强血脂水平的监测、早期诊断、 定期筛检、预防和治疗已成为降低脑血管疾病中的重要 优化培养基（％）：ＫＨＰＯ００５，橄榄油０６，酵母 ２ ４ ［３］ 膏０３，Ｔｗｅｅｎ－８００１％，ＮａＨＰＯ ０１，蛋白胨 ０５， 举措 。脂蛋 白脂肪酶 （Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｌｉｐａｓｅ，简称 ２ ４ ［４５］ ＭｇＳＯ ·７ＨＯ０１，麦芽浸膏０３。 ＬＰＬ） ，是血脂含量检测的重要工具酶，在临床诊断疾 ４ ２ ［６］ 种子培养基（％）：葡萄糖０１，蛋白胨０５，酵母浸 病中用量很大，但我国却没有生产，一直依赖于进口 ， 因此，增加了病人的医疗费用，而且严重制约了我国 膏０５。 研究这种工具酶试剂盒的步伐。根据脂蛋白酯酶的 发酵培养基 （％）：蛋 白胨 ０５，ＭｇＳＯ ·７ＨＯ ４ ２ 疏水性较强的性质和酶蛋白的电荷差异，本文采有 ００５，酵母浸膏０３，ＫＨＰＯ００５，橄榄油０５。