基于四引物扩增受阻突变体系PCR的多重乳腺癌相关SNP.pdfVIP

中国科学: 生命科学 2012 年 第42 卷 第2 期: 143 ~ 147 SCIENTIA SINICA Vitae SCIENCE CHINA PRESS 论 文 基于四引物扩增受阻突变体系PCR 的多重乳腺癌 相关SNP 位点检测方法的建立 ①† ②† ② ①* ②* 刘颖 , 张晨 , 王淼 , 吴希阳 , 马学军 ① 暨南大学理工学院食品科学与工程系, 广州 510632; ② 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所, 病毒基因工程国家重点实验室, 北京 100176 * 联系人, E-mail: tkentwu@; maxj2004@ 收稿日期: 2011-10-10; 接受日期: 2011-12-30 doi: 10.1360/052011-628 摘要 为提高单核苷酸多态性检测的通量, 引入多重嵌合引物 PCR 和毛细 关键词 管电泳对四引物扩增受阻突变体系PCR 进行改进. 针对乳腺癌位点rs4784227 单核苷酸多态分型 四引物扩增受阻突变体系PCR (CT), rs1219648(GA)和 rs3803662(TC)设计特异性嵌合引物, 经一次 PCR 多重PCR 扩增后, 通过毛细管电泳分析产物长度, 同时确定3 个位点的基因型. 70 份全 毛细管电泳 血和口腔拭子样本, 电泳结果均与测序一致, 实现成功分型. 本方法仅需一次 PCR 和一次毛细管电泳即可获得3 个位点的分型结果, 操作简单、快速准确. 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一. 已有研究 交叉引物PCR(PCR with confronting two-pair primers, 表明, 易感基因FGFR2(fibroblast growth factor recep- PCR-CTPP)[7] 因其操作简便、分型快速、费用低廉而 tor 2)和TNRC9(the trinucleotide repeat containing 9)的 被广泛应用[8~10]. 其原理为: 针对已知的突变, 在突 变异对 ER+(estrogen receptor-positive)乳腺癌的影响 变点的两侧分别设计一对外引物和一对特异性内引 明显[1]. TNRC9 基因上的rs4784227(CT) 多态是基于 物, 特异性内引物用来检测突变是否发生, 外引物在 中国女性筛选出的易感位点[2]. rs1219648(GA)和 PCR 反应中和特异性内引物配对, 从而选择性地扩 rs3803662(TC)分别为FGFR2 与TNRC9 基因的主要 增突变型与野生型个体基因. 特异性内引物的设计 研究对象, 是导致中国女性乳腺癌恶性程度加深的 保证了在同一次扩增中野生型和突变型基因产生的 遗传因子[2~5]. 因此, 对这 3 个位点建立多重检测方 扩增片段长度不同, 因此可以通过产物电泳图谱中 法具有临床应用价值, 可作为乳腺癌高危人群预防 特定条带的有无判别个体的基因型[6,11]. 和早期治疗的参考依据. 目前, T-ARMS-PCR 仍以单重检测为主, 少数实 在近年来出现的多种单核苷酸多态性(single