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结核杆菌热休克蛋白,$ 与绿色荧光蛋白基因真核共表达质粒的构建
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曾曙光 !张积仁 !章锦才 !吴世卿 !刘启才 !艾伟健 !薛国初 南方医科大学附属口腔医院 广东省口腔
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医院 广东广州
F’$%$ 南方医科大学珠江医院肿瘤中心 广东广州 F’$% 广州医学院实验医学研究中
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心 广东广州 F’$’%
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摘要 目的 利用GHI/J./KLM 载体构建含有人巨细胞病毒N@O=0:C13P297QRSTU启动子调控表达的结核杆菌热休克蛋
白 ,$ V0=WJM,$U 与增强型绿色荧光蛋白 !/KLM 基因双顺反子真核表达载体GRST.B6G,$.HI/J./KLM 方法 根据
基因全长 的特异引物 扩增获得 基因序列 将 产物进行 载体克隆获得重组质粒
0=WJM,$ @XY+ MRI 0=WJM,$ MRI Z
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MSX.’%Z.0=WJM,$ 测序分析选定序列正确的克隆提取质粒 用限制性内切酶!# H 和$%#I[H 酶切GSX! ’%!Z.Z\ 和
质粒 将 基因定向亚克隆至 载体 酶切鉴定 构建获得含 和
GRST.HI/J./KLM 0=WJM,$ GRST.HI/J./KLM $ $ 0=WJM,$
基因的重组质粒 介导下转染 细胞 并分别在荧光显微镜下观察 的表达和以
/KLM ]2G^:@=1028: ( ’- $ /KLM _:6=:98[
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‘3= 检测 0=WJM,$ 蛋白表达情况 结果 酶切见特异酶切图谱 该载体在瞬时表达时获得 0=WJM,$E/KLM 的良好表
达 结论 含 和 基因双顺反子真核表达载体
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