植酸酶高产菌株的筛选及其基因分析.pdfVIP

维普资讯 农业生物技术学报 JournalofAgriculturalBiote ! (!! !=!! · 研究论文 · 植酸酶高产菌株的筛选及其基因分析 彭远义 + 马丽苹 李春明 刘生峰 周泽扬 + (1．西南农业大学重庆市蚕桑学重点实验室微生物中心，重庆400716； 2．西南农业大学动物科技学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室，重庆400716) 摘要：从土壤中筛选到产植酸酶活性较高的黑曲霉(Aspergillusniger)菌株03214，其植酸酶最适pH值为 1．5和2．5，最适 温度为50℃，植酸酶表达量为 345U／mL发酵液。通过对黑曲霉 03214植酸酶phyA基因进行PCR扩增，获得了1条长约 1．5 kb的特异性产物。以pMD18．T为载体，构建了含有 目的基因片段的重组质粒。DNA序列测定表明，目的基因片段含有植酸酶 phyA基因的完整序列，基因全长 l506bp，其中包含一段长 102bp的内含子，编码467个氨基酸，有 l0个潜在的糖基化位点， 5’端有一编码 l9个氨基酸的信号肽序列。实验结果为植酸酶的进一步研究提供了新的材料。 关键词：植酸酶：黑曲霉 03214；phyA基因；序列分析 ScreeningofAspergillusniger03214StrainProducingPhytaseand SequenceAnalysisofItsPhytasephyA Gene PENGYuan-Yi2 MA Li—Ping2 LIChun-Ming~ LIU Sheng—Feng~ ZHOU Ze—Yang (J．MicrobiologyCenter,ChongqingKeyLaboratoryofSericulture,SouthwestAgriculturalUniversity,Chongqing400716,China； 2．ChongqingKye LaboratoryofForageHerbivore,CollegeofAnimalScienceTechnoloyg,SouhtwestAgriculturalUniversiyt, Chongqing400716，Chn／a) ^b—l_。t：Atotalof102phytase—producingmicroorganismswerescreenedfrom thesoil．Themostactivefungalisolateofhtem， designated03214．wasidentifiedasAspergillusniger．Th eoptimalpHvaluesfortheactivityofhtephytaseproducedbyAspergillus mger03214werefoundtobenipH 1．5ot2．5andhteoptimalreactiontemperatureofthephytaseforitsactiviytWaSabout50℃．Cul- tivatedwim ashakingmehtod．htephytaseofhtestrainWaS producedat345Um／Lfermentedliquid．Th ephyA geneencodingphytase WaS clonedrfom Aspergillusniger03214byPCR．NucleotidesequencenaalysisofhtephyAgenerevealedthathtecodingregi0nWaS 1506bpni lengthnicludedwiht a102bpnitron，nadencodedapeptideof467aminoacidresidues．A singalpeptideencodnig19 aininoacidswasofundatthe5end．Th