盐藻多糖提取及初步纯化.pdfVIP

第33卷第4期 渤海大学学报(自然科学版) V01．33．No．4 2012年 l2月 JournalofBohaiUniversity(NaturalScienceEdition) Dec．2Ol2 盐藻多糖提取及初步纯化 李秀霞，孙协军，王 珍，李 娇，井雅超 (渤海大学 化学化工与食品安全学院，辽宁 锦州 121013) 摘 要：对提取B一胡萝 卜素后的杜氏盐藻渣中多糖的提取、初步纯化和多糖脱色方法进行 了实验研究．实验采用水浸提的方法，考察了提取温度、提取时间、液固比和pH值对盐藻多糖提 取率的影响，盐藻多糖的最适提取条件为：提取温度：70℃，提取时间：4h，液固比：30：1，pH值 l0，在此条件下，盐藻多糖的提取率为8．63％，多糖含量为65．73％．采用分级醇沉和分步醇沉 的方法沉淀多糖，得到醇沉最佳条件为无水乙醇一步醇沉．采用中性蛋 白酶水解脱除盐藻多糖 提取液 中蛋 白质，脱除率为61．55％，脱蛋 白后多糖含量为70．96％，采用过氧化氢对脱蛋 白后多 糖提取液脱色，脱色率为78．66％． 关键词：盐藻；多糖 ；提取；醇沉；脱色 中图分类号：TS219 文献标志码 ：A 文章编号：1673—0569(2012)04—0334—07 0 引言 盐藻，即盐生杜氏藻(DunaliellaSalina)，为绿色单细胞藻，形态微小，没有细胞壁，可以在从接近淡水 一 直到饱和盐水的介质中生存、繁殖¨J．盐藻可以在盐碱地、盐湖、粘土地、滩涂以及浅海、湖泊养殖 ． 盐藻富含31一胡萝 卜素和高度不饱和脂肪酸等生物活性物质，是国际上公认的天然B一胡萝 卜素来源，提 取 8一胡萝 卜素剩余的盐藻渣中含有丰富的蛋 白质、多糖和微量元素等多种营养和生物活性物质．随着 盐藻产业的发展，提取 B一胡萝 卜素后藻渣的有效利用和开发成为重要课题；同时人们在筛选各种海洋藻 类生物活性中发现，盐藻具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种功效，而多糖复合物是发挥其活性功能的主 要成分 ．提取盐藻中多糖作为食品添加剂或药品的原料对于盐藻的开发利用具有重要的意义，在传统 的多糖提取中，主要利用溶解度的不同，根据提取多糖的性质，选择适当的溶剂，冷提或热提 ．盐藻多糖 提取方面的相关研究报道还很少，因此，本实验对盐藻多糖的提取、醇沉工艺的研究及初步纯化方法进行 研究，为盐藻多糖的进一步开发和利用奠定基础． 1 材料与方法 1．1 实验材料 盐藻粉购 自大连丰源达饵料有限公司． 1．2 主要试剂 中性蛋白酶(无锡酶制剂厂)，苯酚 (天津大茂化学试剂厂)，葡萄糖 (沈阳市新城化工厂)，其它试剂 均为分析纯． 1．3 仪器设备 101B一2型电热鼓风干燥箱(上海申光仪器仪表有限公司)，SHZ—D(Ⅲ)循环水真空泵 (上海申光 收稿 日期：2012—09—20． 作者简介：李秀霞(1973一)，女，副教授，从事海洋微藻生物活性成分提取分离及开发利用的研究工作 万方数据 第4期 李秀霞，孙协军，王 珍 ，李 娇 ，井雅超：盐藻多糖提取及初步纯化 335 仪器仪表有限公司)，RE一200型旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂)，HH型数显恒温水浴锅 (金坛市金 城国盛实验仪器厂)，FA一2004型电子分析天平 (上海恒平科学仪器有限公司)，TD5A—WS型台式低速 离心机 (长沙湘仪离心机仪器有限公司)，棱光722N型可见分光光度计 (上海精密科学仪器有限公司)． 1．4 实验方法 1．4．1 盐藻粉的预处理 适量盐藻粉加入 5倍量的乙酸乙酯室温浸泡 10h后，超声波辅助浸提30min后减压抽滤，所得滤渣 重复浸提至浸提液浅黄色，滤渣置 60℃烘箱干燥至恒重，即得到脱脂后盐藻粉． 1．4．2 多糖提取方法 精确称取 1g盐藻粉，加入一定量的提取剂，搅拌均匀，在一定温度下，水浴加热一段时间后过滤，将 滤液浓缩，不断搅拌下加入4倍体积的95％乙醇，醇沉，静置过夜后过滤，