对硝基苯胺与牛血清白蛋白的相互作用.pdfVIP

第30卷，第5期 光 谱 实验室 V01．30。No．5 201 ChbwseJou,‘hal 3年9月 of 3 Spect，‘oscopyLaboratory 对硝基苯胺与牛血清白蛋白的相互作用① 黄芳③ 周 宏 陈昌云 (南京晓庄学院生物化-r-_与环境工程学院南京市江宁区弘景大道3601号211171) 摘 要 采用荧光光谱法研究了不同酸度下对硝基苯胺与牛血清白蛋白(BSA)间的相互作用。实验 结果表明，对硝基苯胺能与BSA形成复合物而导致BSA内源性荧光猝灭，猝灭机理为静态猝灭过程。经计 算得到了不同酸度和不同温度下对硝基苯胺与BSA反应的结合常数、结合位点数。结合过程的热力学参 数变化表明，该相互作用是一个熵增加、Gibbs自由能降低的自发作用过程，其作用力类型主要为静电作用 力。 关键词对硝基苯胺；牛血清白蛋白；相互作用 中图分类号：0657．32 文献标识码：A 文章编号：1004·8138(2013)05-2055～04 1 引言 对硝基苯胺是染料工业极为重要的中间体，可用于直接合成多种染料，也可作为合成农药和兽 药的中间体，同时还是防老剂、光稳定剂、显影剂等的原料[1’2]。对硝基苯胺是一种强烈的高铁血红 蛋白形成剂，具有较大毒性，其毒性比苯胺大，空气中容许浓度为5mg／m3，吸人、口服和皮肤接触 均有害‘引。对硝基苯胺是典型的有机环境污染物之一，其对水体可造成污染，含对硝基苯胺的废水 毒性大，难以生物降解。血清白蛋白是血浆中含量最丰富的蛋白质，含有多种可配位基团，可与许多 化合物结合。研究有机毒物分子与血清白蛋白的相互作用对于进一步了解此类化合物的中毒机理 serum 在体内的作用机制具有重要意义，也为进一步给生理学方面重要蛋白质与毒物小分子的相互作用 提供重要信息。 2 买验部分 2．1试剂与仪器 度计(上海雷磁仪器厂)。 X10一mol／L，于 牛血清白蛋白(BSA，中国医药集团上海化学试剂公司)：储备液浓度1．0 所用溶液均以0．1mol／I。NaCl溶液配制，以维持离子强度。实验用水为二次去离子水。 ①国家自然科学基金项目；南京晓庄学院科研项目(2012NXYl8)资助 ②联系人，手机：(oE-mail：fanghuan91998@163．corn 作者简介：黄芳(1978--)，女．贵阳市人，讲师．硕士．主要从事复杂体系的分析和研究工作。 收稿日期：2013—01—25；接受日期：2013—01—28 万方数据 光谱实验室 第30卷 2．2实验方法 8．4的Tris—HCl缓冲液，方法同上进行测定。 3 结果与讨论 3．1 荧光光谱及荧光猝灭机理 按实验方法，保持溶液pH7．4，温度298．15K，改 变对硝基苯胺浓度，扫描BSA的荧光光谱图变化，见 图1。从图中可以看出，随着对硝基苯胺浓度的增大，在 343nm附近BSA的荧光强度呈有规律逐渐降低并蓝LL 移，说明对硝基苯胺与BSA之间发生了较强的相互作 用。 荧光强度被猝灭的机制分为3种：动态猝灭、静态 猝灭和非辐射能量转移口]。随着温度的升高，动态荧光 猝灭常数增大，而静态猝灭常数变小。动态猝灭过程 ig[(F。一F)／F]一lgK。+姐19[Q]。 式中：K。——结合常数；，2——结合位点数。假设生物大分子有以个相同且独立的结合位点数，将所 不同pH和不同温度下的结合常数K。和结合位点数，z，实验数据见表2。从表2中数据可以看出， 万方数据 第5期 黄芳等：对硝基苯胺与牛血清白蛋白的相互作用 约为1，表明二者间以1：1的比例结合。