芳香族氨基酸作探针荧光猝灭法测定痕量抗坏血酸.pdfVIP

第30卷，第2期 光谱实验室 V01．30，No．2 0 2 1 ChineseJournal 0 3年3月 of March。21 3 SpectroscopyLaboratory 芳香族氨基酸作探针荧光猝灭法 测定痕量抗坏血酸 董存智① 桂王艳 吴雯辉 (淮北师范大学化学与材料科学学院安徽省淮北市东山路100号235000) 摘要在pH 7．0的B-R缓冲溶液中，基于抗坏血酸对色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸等芳香族氨基酸荧 光的猝灭作用，建立了荧光猝灭法测定抗坏血酸的新方法。在最适宜条件下，方法的线性范围和检出限分 0．0038mg／L(苯丙氨酸体系)。方法已应用于实际样品的测定并对反应机理进行了探讨。 关键词抗坏血酸；荧光猝灭；色氨酸；酪氨酸；苯丙氨酸 中图分类号：0657．32文献标识码：B 文章编号：1004—8138(2013)02—0645．04 1 引言 抗坏血酸(又称维生素c，简称VC)是一种水溶性维生素，它能活化羟化酶，促进组织中胶原的 形成，能促进胚胎干细胞分化成造骨细胞Ⅱ3。抗坏血酸参与体内许多物质的代谢过程和氧化还原过 程，具有解毒作用，对癌症、肝炎等疾病具有一定的预防作用，是人体不可缺少的物质。测定抗坏血 酸的方法有分光光度法‘幻，原子吸收光谱法‘引，电化学分析法[u，色谱法‘53和荧光光谱法‘63等。色氨 酸、酪氨酸和苯丙氨酸等芳香族氨基酸是仅有会发荧光的天然氨基酸，它们也是蛋白质荧光的主要 来源，以芳香族氨基酸为荧光探针的应用研究尚不多见[7]。本实验发现，抗坏血酸对色氨酸、酪氨酸 和苯丙氨酸等芳香族氨基酸的荧光有猝灭作用，且在一定范围内与抗坏血酸的加入量呈线性关系， 据此，建立了荧光猝灭法测定抗坏血酸的新方法，相比已有的荧光光谱法邙]，本法具有操作简单，灵 敏度高，应用于实际样品中抗坏血酸含量的测定，结果满意。 2 实验部分 2．1试剂与仪器 分析纯。实验用水为18Mfl·cm的高纯水。 公司)；pHS一3C型精密pH计(上海虹益仪表有限公司)。 2．2实验方法 ①联系人．电话；(0561)3803662；传真：(0561)3803662；E—mail：czdonghb@126．COrn 作者简介：董存智(1954一)．另，山东省蓬莱县人．教授．主要从事光度分析工作。 收稿日期：2012—06—06；接受日期：2012．07—27 万方数据 光谱实验室 第30卷 血酸者的荧光强度为F，试剂空白的荧光强度为Fo，计算△F=F。一F。 3 结果与讨论 3．1 荧光光谱 在实验条件下，色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸有荧光，当加入抗坏血酸后其荧光发射峰位保持不 变，荧光强度随抗坏血酸浓度的增大而降低。实验结果如图1所示。抗坏血酸对相同浓度色氨酸、 酪氨酸、苯丙氨酸的荧光猝灭程度依次为色氨酸酪氨酸苯丙氨酸。 3．2反应时间的影响 在实验条件下，改变静置时间的实验结果表明，抗坏血酸与色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸的反应在 20min内完成，体系的荧光强度在1h内保持不变，故本实验选择反应时间为20min。 800 800 600 600 400 ≤400 q 200 200 O