基于SYBRGreenI的双链DNA定量方法.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（１）：５５～６０ 基于ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩ的双链ＤＮＡ定量方法 １ １ １ １ １，２ 刘　歆 　徐根明 　郭江峰 　丁先锋 　高晓莲 （１浙江理工大学生物工程研究所　杭州　３１００１８　２休斯敦大学生物学与生物化学系　休斯敦　ＴＸ７７００４－５００１　美国） 摘要　基于ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩ荧光染料与双链ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）结合产生荧光的原理，建立一种高精度、 高通量的双链ＤＮＡ定量方法。将梯度稀释后的基因组ＤＮＡ及已知浓度的 ＤＮＡ与等体积的 λ ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩ（４×）充分混合后，利用荧光定量ＰＣＲ仪采集荧光信号，以ＲＯＸ（１×）作为校正染料 进行定量分析；同时利用紫外分光光度计对样品进行平行测定，比较该方法与紫外分光光度法的 检测限与准确度。紫外分光光度法的检测限为２ｎｇ／ｌ，而ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩ荧光定量法的检测限