高效液相色谱法同时测定水产品中四种氟喹诺酮类药物残留前处理条件的优化.pdfVIP

水 产 养 殖 34卷 肉，组织匀浆。准确称取(5．00+0．05)g为检测样品， 复溶，经 0．22 m微孔滤膜过滤后，供液相色谱分 置 50mL离心管中，加入 10．0mL四丁基溴化铵溶 析。 液 (7mm01／L，pH2．O)，漩涡混匀 1min，超声 20 1．4．2 样品提取条件 的优化 实验采用 3个不同 min，5000r／min离心 10min，取上清液，转移至另 pH值 (pH=1，pH=2，pH=3)对样品进行提取条件优 外一只离心管中。将残渣重复上述步骤提取 1次 ， 化。通过对氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙 合并上清液，8000r／min离心 5min，上清液即为样 星的回收率进行评价，观察不同DH值和不同药物 品提取液。 浓度下各提取液的提取效率。实验重复5次，比较 将固相萃取柱依次用 3．0mL甲醇和3．0mL四 不同pH值提取液对回收率的影响。 丁基溴化铵缓冲液(7．0mmol／L，DH1．0)活化，取2．0 1．4．3 净化条件的优化 试用两种不同型号的固 mL样 品提取液过柱，自然流干，再先后加入 3．0mL 相萃取小柱(waters0asisMCX、Waters0asisHLB) 四丁基溴化铵缓冲液 (7．0mmo1／L，pH 1．0)和 2．0 在不同的淋洗条件下进行了对比实验，具体方案见 mL甲醇(5％)溶液淋洗。3．0mL甲醇洗脱，收集洗 表 1。 脱液于玻璃试管中，50℃氮气吹干，1．0mL流动相 采用 4套不同实验方案，通过改变活化、淋洗 表 1 前处理中固相萃取过程的优化 和洗脱时的不同试剂的选择及DH值 17的改变， 个添加浓度的回收率和精密度试验。 确定前处理中固相萃取过程的优化条件 (表 1)，并 2 结果 比较其样品回收率情况。 2．1 样品提取条件优化结果 1．4．4 色谱分离条件的优化流动相pH值、水相缓 实验结果，当pH=2，7．0mmo1]L四丁基溴化铵 冲液浓度、有机相与水相比例及不同的流动相体系 溶液作为样品提取液时，氧氟沙星、环丙沙星和恩 分别为：0．05mol／mL柠檬酸乙酸铵缓冲液(pH3．5) 诺沙星的回收率得到提高，分别为 100．4％，82．1％， +乙腈 =16+84，四丁基溴化铵溶液 +乙腈 =94 83．6％，有效降低杂质干扰。诺氟沙星在pH=1时，回 +6，四丁基溴化铵溶液 +乙腈 +甲醇=90+7+3 收率为 93．0％，但杂质相对较多；pH：2时，回收率为 等，进行了多方位的实验，比较不同DH值和四丁基 88．6％(表 2)。综合4种药物的回收率情况，选取提 溴化铵溶液浓度对色谱峰响应值的影响，以及4种 取液的DH值为2。 氟喹诺酮类化合物分离情况。 表2 不同pH值提取液对回收率的影响 1．4．5 药物标准线性范围和定量限的确定 采用 氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星和环丙沙星 4种药 物的标准品，配制 0．002、0．005、0．025、0．05、0．5 g／ mL标准添加工作混合溶液，在上述色谱条件下进 行测定。以峰面积响应值为纵坐标，标准添加工作 混合溶液浓度值为横坐标 ，确定标准工作曲线、线 性范围和定量限。 1．4．6 优化方法的应用 采集草鱼、鳙鱼、大黄鱼、 虾样 品进行 了4．0、10．0、100．0和 1000．0 g／kg4 第 1期 丑亚琴，等 高效液相色谱法同时测定水产品中四种氟喹诺酮类药物残留前处理条件的优化 23 2．2 净化条件的优化结果 法，以保证各化合物的响应值达到最大。氧氟沙星 实验发现活化和淋洗液的不同pH值对固相萃