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J Infect 2013，V01．40，No．5 ·293·
国际流行病学传染病学杂志2013年10月第40卷第5期InterEpidemiolDis，October
·论著·
肠道病毒71型衣壳蛋白VPl的原核表达
和纯化及其抗原性和免疫原性的验证
朱赘 李剑波 高孟 唐彩华 罗永能
【摘要】 目的探究利用大肠埃希菌原核表达系统表达的肠道病毒7l型(EV71)衣壳蛋白VPl的抗原
I和Xho
性和免疫原性。方法将EV71H3．TY株的VPl基因通过PCR扩增，并引入NdeI酶切位点，定
VPI表达载体，转化大肠埃希菌BL21(DE3)，并用IPTG诱导VPl的表达。然后将表
向克隆至pET44a—EV71
达的重组VPl(rVPl)经超声、离心和Ni—NTA亲和层析柱纯化并透析复性，用Western免疫印迹法和先前建
立的夹心ELISA等方法检测其抗原活性，同时用rVPI免疫兔子并通过测定其诱导的特异性抗体水平来确
定其免疫原性。结果rVPl在大肠埃希菌中主要表达于包涵体中，但能被顺利且有效地纯化和复性。SDS-
PAGE显示表达的rVPI相对分子质量约为34000，与预期大小相符。纯化的rVPl可分别与兔抗EV7l多克
隆抗体、大鼠抗EV7lVPI单克隆抗体(单抗)和小鼠抗EV7lVPl单抗进行特异性免疫应答。rVPl免疫兔诱
导产生的特异性抗体效价高达729
000，高于本底效价，且差异有统计学意义(t=2．646，P0．01)。结论
EV71
VPl在大肠埃希菌原核表达系统中得以成功表达，纯化的rVPl具有良好的抗原活性和免疫原性。
【关键词】肠道病毒感染；衣壳蛋白；原核表达
and ofrecombinantEV71 VPIandits and
Prokaryoticexpressionpurification capsidprotein antigencity
ZHU 0 NG Viral
Yun，LI．]iondoo，GA Cai·huo,LUO Diseases，
immanogenicity Meng，TA Yong-neng．Instituteof
A Medical
of 310013，China
Zhejiongcademy Sciences，Hangzhou
author：LUO
CorrespondingYong-neng，E—mail：ynllOl@163．com
To enterovirus71 VPl Ecoli
【Abstract】Objectiveexpress capsidproteinby prokaryotieexpressionsys—
temand its and The ofEV71strainH3oTyVPl
exploreantigencityimmunogenicity．Methodscodingsequence
was PCRandclonedinto sites．The
the vectoratNdeI andXhoI resultant
amplifiedby pET44a
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