短串联重复序列图谱分析法鉴定HEK293细胞传代的稳定性.pdfVIP

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2017-09-14 发布于湖北
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短串联重复序列图谱分析法鉴定HEK293细胞传代的稳定性.pdf

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·365· ·论著· 短串联重复序列图谱分析法鉴定HEK293 细胞传代的稳定性吴洁李剑波毛子安吴小红陈科达高孟陈刚姜云水金素凤庄坊成【摘要】目的用短串联重复序列(sm)图谱20位点分析法对疫苗研发用HEK293细胞的传代稳定性进行研究。方法对购自美国菌毒种保管中心(A1：1[℃)的ttEK293细胞进行传代，按中国药典三部要求建立主种子库(第40代)，工作种子库(第43代)和生产终末细胞(第65代)，并进行STR检测；按检测要求进行细胞扩增，i)NA提取，P13R扩增及STR20位点分析。结果SIll图谱加位点分析法已全面覆盖美国ATCC9 位点和中检院16位点法，三级传代细胞检测结果与ATCC标准株293EeR_shh(^dvS)匹配度100％，与中检院检测结果完全一致，无外源细胞的污染。结论本实验室传代建库的ttEK293细胞遗传稳定。无外源细胞污染，符合疫苗研发用要求。【关键词】串联重复序列；m勉93；细胞传代稳定性 Ke-da，C,40 0,11，劂x1．o-ho．g，C／-／ENMeng，删白够，I／ANGYun-shni，]IN鼠扣苫，ghTJAN(；Fang-ch孵．。lna／tute 310053，aI妇 ofVirus溉。zhe乒a,．g知蜘oyMed／oa／岛白编，Ha,-i静Fiou cl耵强pm击姆m吐IlDr：ZBUAIVGl=．ang-cheng，E-mail：f,=hua,,g@163．corn To the ofHEK293cellwtfiehusedfor short 【舢嗣喇】Objeaiveidentifypassagestability vaccine形赫b cell tandem HEK293 fromAlnerir．Ameuhlirecollection(Arcc) line谢gi豫l type I琶peat(STI!)阿6lillg．Melblxls andsd鹪masterseed edl (USA)was b吐nk(e43)and passages link(P40)，w蝇seedm越眦h痂I塔telmiml ofChina SIR dcell (附)∞嘲她therequiremenlsphannacopoeia，andap豳ed plI斑iIlsstepbystep amolifieation， DNA andSIR 20 SIR 20sitesto9 e,xti枷olrl。p(=R amplificationpr．alingby sites．R祧col叩删ofpIl她by Sill20Sit酷covered811 of9sitesand16sites．Threedif- sites(燃)and16sites(NICPBP)，the i．nooa眦indicates of standardcelllinemarked盥293EcltShh ferent HEK293P40．P43andP65werematched100％toATCC passages a