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·284· 国匿逋堑痘堂篮鎏瘟堂盘查垫!!生!旦笙塑鲞筮!塑丛』坠丛型墅型堕：妞垫!!：型：塑：坐：!
·短篇论著·
多重聚合酶链反应法在口岸检疫传染病
检测中的应用
侯瑞生 王丽 张勤 薛云红王胜启 张蕾李丽 王凯娟
【关键词】聚合酶链反应；霍乱弧菌；疟疾；结核分枝杆菌
PCRford西睇6∞of
Mmfii瞳ex portqmrannne如《＆廿oI塔
diseases Yun-
HOU Li，ZHANG
Pad-sheng，WANGqin，XUE 3
Iei，12
hong，WANGShmg-qi，ZHANGl_i，WANG陋胁．为779
bpN564bp。
chain
reaction；V／br／ocholerae；
【Keywords】Polymemse
2．结核分枝杆菌
adaerod,osis
Malaria；Mycobacteriwn
mlthor’s and 两对引物分别对应于结核分枝杆菌65KD表面抗原和插
【nrst address】Henan
Entry-Ex扛Inspection
450003，China 入序列IS6110，其扩增产物长度分别为383bp和123bo。引
QuarantineBureau，Zhe,珈u
5-AGCT-
髦日对A：Al5’一GAGA’I℃GAG(1∞AGGAllcG3’，A2
面对严峻的国内外突发急性传染病疫情的流行趋势，传 G(∽CCcAAAG(册3’；引物对B：Bl
统的传染病监测方法已不能满足口岸快速检验的需要。多 GCGTCGG-3’，82
重PCR的优点在于能够同时分析不同的DNA序列，可以实 3．疟原虫
现一次PCR反应检测多种病原体的目的。本研究对多重 根据EMBL数据库中恶性疟原虫与间日疟原虫红内期
PCR法用于检测结核分枝杆菌、霍乱弧菌及疟原虫等传染病
病原的应用进行观察，现将结果报道如下。
材料与方法
37。扩增产物分别为274 bp。
bp乘1421
一、临床样本和主要材料 三、模板的制备
24份疟疾患者滤纸干血斑样本采自从非洲、东南亚等疟 血液：剪下滤纸干血斑，置O．5—llLEP管，加入50止5％
疾流行区回国人员中疟疾患者，54份结核分枝杆菌阳性痰样 chelex-1130，充分振荡30s，煮沸10min，再充分振荡30s，
本培养物DNA和8例霍乱弧菌DNA来自河南省CDC，35份
15000Xg离心，取上清为模板。痰液：痰液加入大约4倍
非结核痰样本来源于呼吸科癌性胸膜炎、急性支气管炎、慢 体积的4％NaOH，充分摇匀，室温下放置15min液化，取
性支气管炎及肺炎等患者。
rain，
1．5瑚IL液化后的痰样本于离心管中，12000×g离心5
主要试剂2X
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