抗狂犬病病毒单链抗体的筛选及鉴定.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（１１）：２７３１ 抗狂犬病病毒单链抗体的筛选及鉴定 １ １ １ ２ 陈继军 　毛晓燕 　乔玉玲 　毕司英 （１兰州生物制品研究所有限责任公司　兰州　７３００４６１　２山东迪博生物技术有限公司　济南　２５０１０１） 摘要　目的：利用噬菌体展示技术构建的噬菌体抗体库，筛选、表达及鉴定具有体外中和活性的 抗狂犬病病毒单链抗体。方法：以２１份接受狂犬病病毒疫苗免疫的健康人外周血构建的抗狂犬 病病毒ｓｃＦｖ噬菌体免疫库为基础，免疫管包被纯化狂犬病病毒颗粒，通过三轮筛选，ＥＬＩＳＡ检测 单克隆噬菌体抗体颗粒的阳性率，ＤＮＡＳｔａｒ和 Ｖｂａｓｅ２对阳性克隆进行序列分析。序列正确的单 链抗体构建原核表达质粒，转化大肠杆菌 ＢＬ２１（ＤＥ３）菌株，ＩＰＴＧ诱导表达单链抗体。经压力破 碎、镍亲和层析对表达的蛋白进行纯化。ＲＦＦＩＴ检测纯化蛋白对狂犬病病毒的体外中和活性。同 时使用间接ＥＬＳＩＡ检测获得的ｓｃＦｖ对３ａＧ，ＣＶＳ，ＣＴＮ及ＰＶ株的交叉反