CXCR4特异性拮抗剂SDF-1P2G54的构建及活性评价.pdfVIP

2012;32(1) 南方医科大学学报（J South Med Univ ） ·55 · 基础研究 CXCR4 特异性拮抗剂SDF-1P2G54 的构建及活性评价 1 1 2 1 1 杨飞华 ，龙北国 ，谭 毅 ，龚 雅 ，马伟峰 1 2 南方医科大学公共卫生与热带医学学院微生物学系，广东 广州 510515 ；温州医学院中美糖尿病并发症研究 所，浙江 温州 325035 摘要：目的对SDF-1进行遗传改造，将其第2 位氨基酸由脯氨酸（P）突变为甘氨酸（G），且缺失其C-端α螺旋结构，以获得一种 CXCR4 特异性拮抗剂SDF-1P2G54。方法 将PCR 扩增的SDF-1突变体SDF-1p2g54 的基因插入表达载体pET-30a(+) ，并转化 BL21(DE3)菌株。IPTG 诱导表达的重组蛋白SDF-1P2G54 在变性条件下采用镍柱亲和层析纯化，并通过梯度稀释和超滤方法 得以复性。利用趋化实验鉴定SDF-1P2G54 对Jurkat 细胞的趋化活性及对SDF-1趋化活性的抑制效应，流式细胞仪检测 SDF-1P2G54 诱导MOLT4 细胞钙内流及细胞表面CXCR4 内在化的能力。结果 SDF-1P2G54 完全丧失激活CXCR4、趋化 Jurkat 细胞跨膜迁移和诱导MOLT4 细胞钙内流的能力，却保持了与CXCR4 的高亲和性，能有效抑制野生型SDF-1对Jurkat 的 趋化效应、诱导MOLT4 细胞表面CXCR4 的快速内在化。结论 SDF-1P2G54是一种新型的CXCR4 特异性拮抗剂，具有开发成 抑制HIV- 1感染和癌细胞转移等重大疾病特效药物的潜在应用价值。 关键词：基质细胞衍生因子-1；CXCR4 ；拮抗剂；SDF-1P2G54 中图分类号：R34 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2012）01-0055-06 DOI: CNKI:44-1627/R1328.021 /kcms/detail/44.1627.R1328.021.html Construction of SDF-1P2G54, a specific antagonist of CXCR4 1 1 2 1 1 YANG Feihua , LONG Beiguo , TAN Yi , GONG Ya , MA Weifeng 1Department of Microbiology, School of Public Health and Tropical Medicine, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China; 2 Chinese-American Research Institute for Diabetic Complications, Wenzhou Medical College, Wenzhou 325035, China Abstract: Objective To obtain a specific antagonist of CXCR4, SDF-1P2G54 by mutating SDF-1 second proline (P) into glycin (G) and removing the α-helix of its C-terminal. Methods SDF-1p2g54 gene amplified by PCR was inserted into the vector pET-30a (+) and transformed into Escherichia coli (E. coli) strain BL21. After IPTG induction of E. coli, the expressed recom