肺炎链球菌耐药表型及红霉素耐药基因分析.pdfVIP

15l6 中国公共卫生2009年 12月第25卷第 12期 ChinJPublicHealthDec2009Vo1．25No．12 文章编号：1oo180{2009)12．15164)2 中图分类号：R378．1+2；R978．1 文献标志码：A 【调查研究与分析】 肺炎链球菌耐药表型及红霉素耐药基因分析 贾建民 关键词：肺炎链球菌；ermB基因；mefA基因；红霉素；耐药基因 肺炎链球菌 (Streptococcuspneumoniae)是引起人类肺 林霉素、青霉素等抗生素均有较高的耐药率 (中介率+耐药 炎、脑膜炎及败血症的最常见病原菌。近年来，肺炎链球菌对 率)；万古霉素、左氧氟沙星对肺炎链球菌仍有较好抗菌活性。 青霉索、红霉素等常用抗生素的耐药率逐年增高，导致经验用 2．2 红霉素耐药基 因型分布 (表2) 在87株肺炎链球菌 药失败，给抗感染治疗带来 困难”。为了解肺炎链球菌的耐 中，检出红霉素耐药株 76株 (耐药 +中介)。总检 出率为 药表型及红霉素耐药相关基因，本研究对2006～2007年分离 94．7％；对红霉素敏感的11株肺炎链球菌均未检 出elTflB、 自郑州大学第五附属医院就诊患者的87株肺炎链球菌株进 mefA基因。 行了药物敏感试验，并进行红霉素耐药相关基因核糖体甲基 表 1 87株肺炎链球菌对常用抗生素敏感试验结果 化酶基因(ermB)及主动外排转运基因(mefA)检测。结果报 告如下。 1 材料与方法 1．1 材料 (1)菌株：收集2006年 1月一2007年 l2月郑州 大学第五附属医院就诊患者的痰液、咽拭子、血液、脑脊液等 标本 中肺 炎链球菌分离株 87株；质控 菌株：肺炎链球菌 ATCC49619。(2)试剂：奥普托欣(Optochin，OP)、四环素、氯 霉素、左氧氟沙星、万古霉素、复方新诺明及红霉素等药物纸 片(英 国OXIOD公 司)；DNA ladder、dNTP、Taq酶 (美 国 Promage公 司)；TfiPureDNA 提取试剂盒 (瑞士 Roche公 司)。(3)仪器 ：VITEK一32全 自动微生物分析仪、革兰阳性 菌 (GPI)卡(法国生物梅里埃公司)。 表2 76株红霉素耐药肺炎链球菌耐药基因型分布 1．2 方法 1．2．1 肺炎链球菌鉴定与药敏 采集患者标本，1h内接种 于5％绵羊血平板，置5％CO 培养箱内孵育l8～24h，根据 菌落特点、镜下形态，奥普托欣敏感试验初筛，采用全 自动微 生物分析仪和GPI卡鉴定肺炎链球菌。药敏试剂采用 K—B 法。结果判断参照文献 [2]。 1．2．2 红霉素耐药相关基因检测 (1)DNA模板制备：挑取 平皿上过夜孵育的细菌，利用TriPure总RNA提取试剂提取 分离菌株DNA，按产品说明书进行操作。(2)eFlnB、mefA基 3 讨 论 因引物序列 】：eFll~ 一f：5 一GAA AAGGTA CTCAAC 在过去 lO年中，对大环内酯类抗生索耐药的肺炎链球菌 CAA ATA -3-．emlB 一 ：5 一AGT AAC GGTACTT从 ATT 已蔓延全球，其基因型与表型具有明显的地区差异H 】。亚 GrrTAC一3，产物长度为 639bp；mefA—f：5’一AGTATC 洲病原微生物耐药监测网(ANSORP)监测数据显示 】，中国 A_1rrAAT CAC TAG TGC 一3 ，mefA—r：5 一rI1℃ 1rI℃ TGG 大陆地区的红霉素不敏感率高达74．8％，中国香港地区的红 TACTAAAAGTGG一3，产物长度为 348bp。(3)PCR扩 霉素不敏感率高达76