分子诊断学的一些研究进展.pdf

临床检验杂志2009年第 27卷第6期 ChineseJournalofClinicalLaboratoryScience，2009，Vo1．27，No．6 401 文章编号 ：1001-764X(2009)06-0401434 中图分类号：R446．9 文献标识码：A · 述评 · 分子诊断学的一些研究进展 王惠民，赵建华 ，钱晖，顾 国浩，潘世扬 分子诊断学是以分子生物学理论和技术为基 因突变是遗传病和肿瘤发生的根本原 因，因为体细 础 ，利用分子生物学技术研究人体生物大分子的存 胞 突变的频率极低 ，很难用一般点突变方法直接检 在、结构及其表达调控，从而为疾病的预测、诊断、治 出．COLD~CR则能解决这一 问题。该法分两步： 疗和预防提供信息和决策依据。 一 在扩增产物的临界变性温度 (criticaldenaturation 目前分子诊断 已广泛应用于临床 ，能进行分子 temperature，Tc)进行变性，随后在单一温度进行退 诊断的疾病涉及染色体疾病、感染性疾病、单基因疾 火与延伸反应 (快速 COLD—PCR)。循环 阈值可用 病、多基因疾病及恶性肿瘤等，分子诊断技术 已成为 于鉴定突变型和野生型DNA．用该法 已成功鉴 定结 临床医学各学科发展的突破点。本文就分子诊断学 肠癌标本中p53和表皮生长因子受体(EGFR)基因 技术进展并结合本期发表的有关论著作一论述 。 突变，能在2000个野生型等位基因中检 出1个突 1 PCR衍生技术 变基 因 。 1．1 甲基化特异性 PCR DNA 甲基化是调控基因 1．3 非对称 PCR．FP技术 若要获得单链测序模 表达的表观遗传机制之一，尤其在肿瘤细胞中存在 板或单链 DNA杂交探针，非对称 PCR是常用方法， 的异常甲基化状态，对肿瘤的早期诊断、预后和疗效 即通过反应体 系中引物浓度 的差异来形成单链 判断具重要价值 。由此开发 出一系列 DNA 甲基化检 DNA，通常两个引物的浓度为(50～100)：l，当某一 测技术。甲基化特异性 PCR(methylation—specific 引物被耗尽后 ，另一引物扩增的片段 即为单链 DNA PCR，MSP)是一种简便、特异、灵敏的单基因序列特 片段。利用非对称 PCR获得单链的性质，可将其与 异性甲基化分析方法 ¨，其原理是用亚硫酸氢钠处 其他技术如测序、荧光偏振 (fluorescencepolariza— 理基 因组 DNA，未甲基化 的胞嘧啶 (c)转变成尿嘧 tion，FP)结合 ，在感染性疾病的基 因型检测方面发 啶(u)，而甲基化的C不变，设计不同的特异性引物 挥作用。荧光偏振检测技术已用于基因组单核苷酸 进行定性分析。钱震等口用该法检测 了AML患者 多态性及基 因型的检测 ，与 PCR技术结合可显著提 骨髓抑癌基因GRAF启动子的甲基化．并证实AML 高检测灵敏度，具快速、准确和低成本特点，易于量 患者GRAF启动子区甲基化明显增高。将亚硫酸氢 化、自动化。利用非对称 PCRFP技术，可对 HPV 钠处理和定量PCR技术结合在一起，检测血清中循 的15个基因型进行快速鉴定 ．也可通过一次PCR 环 septin9的甲基化，可作为检测结直肠癌微 小侵 扩增 ，同步检测沙眼衣原体和解脲脲原体 ¨，尤其 袭的生物标志 J。DNA 甲基化与肿瘤的关系已得 易于检 出同一标本不同病原体的混合感染 J。 到 了普遍肯定。 2 生物芯片(biochip)技术及应用 MSP是 目前检测DNA单位点甲基化最常用方 高通量检测技术以生物芯片(biochip)为代表 ， 法，但存在