抗增殖蛋白Tob1参与雌激素受体号通路的初步研究.pdfVIP

中国科技论文在线 抗增殖蛋白Tob1 参与雌激素受体信号通路 的初步研究# 1 1 2 1** 刘畅 ，徐加英 ，王利利 ，焦旸 5 （1. 苏州大学医学部放射医学与防护学院，苏州 215123； 2. 苏州大学附属第一医院放疗科，苏州 215006 ） 摘要：目的：探讨抗增殖蛋白Tob1 抑制乳腺癌细胞增殖的具体信号通路。方法：采用自行 构建的Tob1 全长和LXXLL 模序缺失、突变体的原核、真核表达载体，经脂质体介导转染 10 乳腺癌细胞。经GST 捕获法和免疫共沉淀法确定Tob1 与ERα 之间的相互作用。采用荧光 素酶报告基因法检测Tob1 蛋白对ERα及其通路下游关键效应分子Cyclin D1 转录活性的影 响。结果：Tob1 与ER α存在相互结合或相互作用：在体外结合实验中，含btg1 结构域及 LXXLL 模序的Tob1 氨基端（1~139aa ）与ER α存在结合作用；LXXLL 突变型Tob1 缺失 体（1-139aa ）仍可与 ER α发生结合，但结合能力弱于野生型 Tob1。荧光素酶活性测定结 15 果发现Tob1 可显著抑制ER 及其下游基因Cyclin D1 的转录活性。结论：Tob1 蛋白至少部 分通过ER 信号通路，在乳腺癌细胞中发挥抗增殖蛋白活性。 关键词：肿瘤；乳腺癌；抗增殖蛋白；Tob1；雌激素受体 中图分类号：R737.9 20 Tumor Suppressor Tob1 Involved in Estrogen Receptor Signaling Pathway 1 1 2 1 LIU Chang , XU Jiaying , WANG Lili , Jiao Yang (1. School of Radiation Medicine and Protection, Medical college of Soochow University, Suzhou 215123; 25 2. Department of Radiotherapy, the First affiliation Hospital of Soochow University) Abstract: Objective: to identify the mechanisms of tumor suppression function of Tob1 in breast cancer cells. Methods: The recombinant plasmid of Tob1, truncated Tob1, and LXXLL motif mutated Tob1 were constructed, transfected into human breast cancer cell lines using lipofectamine. In vitro GST-pulldown assay and immunoprecipitation assay were utilized to 30 confirm the interaction between Tob1 and ERα . Luciferase assay was used to detect the effects of Tob1 on the transcription activity of ER an