组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的实验研究.pdfVIP

196 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, February 2008, Vol. 22, No.2 · · 组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的实验研究 1 1 1 1 1 2 张琮 王乃佐 陈辉 周光峰 张国安 韩斌 【摘 要】 目的 探索由人表皮干细胞、成纤维细胞与纤维蛋白支架构建的组织工程皮肤修复全层皮肤缺损的 可行性。 方法 将人全层皮肤采用胰蛋白酶消化法使表皮干细胞和真皮成纤维细胞分离后，分别在无血清培养基中行 4 4 原代及传代培养。将体外扩增培养至第3、4 代的表皮干细胞（5×10 /mL ）和真皮成纤维细胞（1×10 /mL ）共0.5 mL 与纤 维蛋白支架（0.5 mL ）混合凝固构建组织工程皮肤。取4 ～5 周龄雄性裸鼠45 只，体重19.5 ～20.3 g ，平均20.0 g ，制备 背部全层皮肤缺损模型。随机分为5 组，每组9 只，分别为空白对照组（C 组），创面仅覆盖凡士林油纱，自然愈合；单纯支 架组（F 组），创面移植无细胞的纤维蛋白支架；表皮支架组（S 组），创面移植含有表皮干细胞的纤维蛋白支架复合物；成 纤维细胞支架组（Fb 组），创面移植含有成纤维细胞的纤维蛋白支架复合物；组织工程皮肤组（T 组），创面移植组织工程皮 肤。术前及术后 1、3、6、8 周行全身及移植部位大体观察；移植后3、6、8 周，取材行组织学、免疫组织化学及扫描电镜观 察。 结  果 细胞培养4 周后，表皮干细胞培养皿内可见圆形细胞，在加有BrdU 的培养液中培养6 d 后可见BrdU 染色 阳性细胞；成纤维细胞培养皿内可见梭形细胞。构建的组织工程皮肤可见CK19 免疫荧光染色阳性细胞、Nestin 染色阳 性细胞。移植后T 组新生皮肤较其余各组生长快、瘢痕轻。术后6 周，C、F 、S、Fb 及T 组皮肤厚度分别为：（0.460 ± 0.049 ）、 （0.480 ± 0.055 ）、（0.540 ± 0.043 ）、（0.510 ± 0.032 ）及（0.660 ± 0.047 ）mm ，T 组明显厚于其余各组，且差异有统计学意义 （P 0.05 ）。术后3、6、8 周，HE 染色及扫描电镜示，T 组新生表皮层数及真皮成纤维细胞、血管数量均多于其余各组，且 T 组真皮血管及胶原纤维排列均较其余各组整齐；术后3 周，Ⅳ型胶原免疫组织化学染色显示，T 组已形成连续的染色带， 而其余各组均不连续；术后6 周，CK14 免疫组织化学染色显示，T 组可见阳性细胞，其余各组均未见。 结论 用表皮干 细胞、成纤维细胞及纤维蛋白支架构建的组织工程皮肤移植后能使创面迅速愈合，可望成为一种较理想的组织工程皮肤。 【关键词】 组织工程皮肤 表皮干细胞 成纤维细胞 创面愈合 中图分类号：R318.08 Q813.1 文献标志码：A EXPERIMENTAL STUDY ON REPAIRING FULL-THICKNESS CUTANEOUS DEFICIENCY WITH TISSUE 1 1 1 1 1 2 ENGINEERED SKIN/ZHANG Cong , WANG Naizuo , CHEN Hui , ZHOU Guangfeng ZHANG Guoan HAN Bin .